Biomicroscopie met betrekking tot het volume van weefselblokken
Biologische microscopie Tot nu toe zijn koude fixatie, bevroren ultradunne coupes en vriesdrogen routinemethoden voor röntgenmicrosecties van weefsels en cellen. De details van deze methode worden als volgt uitgelegd:
Voor biologische microscopen met een condensor kan de condensor op en neer worden bewogen om de helderheid gematigd te maken, en de opening van het variabele licht kan ook worden gewijzigd om een gematigde helderheid van 9b te bereiken. Als het licht zonnig is, kan de condensor op de juiste manier worden opgetild en kan de opening van de variabele lichtbron op de juiste manier worden vergroot. Als het licht te sterk is, kan de condensorlens op de juiste manier worden neergelaten en kan de opening van het kruisende licht op de juiste manier worden verkleind. Als u zich in dit geval nog steeds verblind voelt, kunt u een geschikt filter kiezen en deze op de beugel onder de condensor plaatsen. Deze eik zal de helderheid kunnen verkrijgen die u tevreden stelt. Het aanpassen van de bovenste en onderste positie van de condensor, het aanpassen van de apertuurgrootte van de variabele optische aflezing en het selecteren van een geschikt filter vereist natuurlijk enige oefening om ervaring op te doen.
Een zeer belangrijk probleem bij biologische microscopie is dat tijdens het bemonsteren en scheiden van cellen, na vriesdrogen en harsinbedding (FD), na het invriezen van ultradunne aggregaten en na vriesdrogen, de inhoud van 65 elementen in elk deel moet zorgvuldig worden behandeld. De te analyseren cellen kunnen niet worden beschadigd. Omdat röntgenmicroanalyse niet alleen veel stappen omvat, maar ook veel kost. Als de geanalyseerde cellen na een lange tijd en meerstapsverwerking beschadigde cellen of dode cellen zijn, is het zeer spijtig om verkeerde conclusies te trekken. Cardiomyocyten gescheiden door behandeling met collagenase hebben bijvoorbeeld twee vormen, de ene is een lange staaf
Biomicroscopie De hoeveelheid en verdeling van elektrolyten in deze twee typen cellen zijn behoorlijk verschillend. Na is erg hoog en K is erg laag in circulaire cardiomyocyten, en de concentratie van ca in nematoden is erg hoog. Na controle met andere analysemethoden is bewezen dat de hoge Na en lage K van ronde cellen en de hoge Ca in mitochondriën te wijten zijn aan de beschadiging van het celmembraan tijdens het celscheidingsproces. De ijskoude fixatiemethode van cellen en weefsels is meestal om eerst uitdoving en fixatie aan te nemen en ze vervolgens op te slaan in vloeibare stikstof. Dovende fixatie is erg belangrijk voor het effect van conservering. Levende cellen of verse weefsels zijn rijk aan water. Bij het blussen worden de delen van de cellen of weefsels die in direct contact staan met het gebroken koelmiddel (vooral bij het blussen met vloeibare stikstof) vaak eerst bevroren en gefixeerd, waardoor een "omhulsel" wordt gevormd, wat de centrale delen van de cellen belemmert. geplet en koud gefixeerd. Daarom wordt bij het uitvoeren van X-lijn microgebiedanalyse vaak ontdekt dat er ijskristallen zijn in het midden van grotere cellen. Om dit te voorkomen wordt een stof gebruikt met een smeltpunt hoger dan dat van vloeibare stikstof maar lager dan dat van 806c als gebroken koelmiddel. Er zijn veel van dergelijke stoffen, maar de gemakkelijkst te verkrijgen, de goedkoopste is geconcentreerd propaan (kookpunt - 42.120c, smeltpunt - 187.10c, molecuulgewicht 44,1), en de afkoelsnelheid is het snelst . Maar het nadeel is dat het brandbaar is.
Biologische microscoop kan de spiervezel op een speciaal rek plaatsen, zodat wanneer de spiervezelcontractie een bepaalde fase bereikt en moet worden gefixeerd, het mondstuk onmiddellijk start om vloeibaar propaan naar de spiervezel te spuiten om het te doven en te fixeren. Vervolgens werden de spiervezels samen met het frame eruit gehaald en in vloeibare stikstof gedaan. Als u bloedcellen of geïsoleerde cellen fixeert, concentreert u de cellen eerst door centrifugatie bij lage snelheid, brengt u de cellen over in een zilveren flesje met goede thermische geleidbaarheid, plaatst u het flesje in vloeibaar propaan en vriest u het in om te fixeren. Bij het fixeren van de alvleesklier van de rat in het Hall-laboratorium werden de twee stalen blokken voorgekoeld met vloeibaar helium (of vloeibare stikstof) en werden de twee koperen blokken met een tang vastgeklemd en op de voor- en achterkant van de pancreas geplaatst om te doven en te fixeren. de alvleesklier. Weefsels of cellen kunnen worden bewaard in vloeibare stikstof voor langdurige opslag na afschrikken en fixeren.
Biologische microscopie Naast de momenteel meest gerespecteerde bevroren ultradunne sectiemethode, is hier nog een depositietechniek die door wetenschappers wordt gebruikt. Er wordt een stof toegevoegd om een sediment te vormen met de te analyseren component om deze voorafgaand aan de analyse te immobiliseren, en het sediment wordt vervolgens geanalyseerd. Zo gebruiken mensen vaak oxalaat en pyroantimonaat om ca in spiercellen af te zetten. De eerste is niet gevoelig genoeg voor de lage concentratie Ca in het cytoplasma; pyroantimonaat is gevoeliger en kan elektronendichte afzettingen vormen met vrij Ca in de hersenen, maar pyroantimonaat is niet compatibel met natrium, mangaan, barium, ijzer. Afzettingen worden ook gevormd en zijn minder specifiek. Het voorbereidingsproces van het monster is vergelijkbaar met het bereiden van gewone ultradunne sectiemonsters met een transmissie-elektronenmicroscoop, het verschil is dat 3 procent kaliumpyroantimonaat (fosfaatbufferzoutoplossing, pH 7,6) gedurende 6 uur vóór fixatie werd gefixeerd, en op de gekleurde spier ultradunne secties, Zwarte afzettingen werden gezien in de middellijnen van banden A en 2 van elke sarcomeer, en ongekleurde secties werden gebruikt voor röntgenmicroanalyse. Diaminobenzidinetetrahydrochloride (DAB) werd gebruikt om heembevattende stoffen neer te slaan, enzovoort. De combinatie van histochemische precipitatiereactie en röntgenmicrodifferentiatiebrug kan worden overwogen in laboratoria die geen omstandigheden hebben voor bevroren ultradunne secties. Semi-kwantitatief kan worden gedaan volgens de piekhoogte van de te analyseren elementen
