Vergelijking van confocale microscoop en gewone optische microscoop
Microscoop is het belangrijkste hulpmiddel voor het observeren van cellen. Afhankelijk van de lichtbron kan deze in twee categorieën worden verdeeld: optische microscoop en elektronenmicroscoop. De eerste gebruikt zichtbaar licht (ultraviolet microscoop tot ultraviolet licht) als lichtbron, terwijl de laatste een elektronenbundel als lichtbron gebruikt. Gewone optische microscoop en laserconfocale microscoop behoren tot dezelfde optische microscoop.
I. Algemene optische microscoop
Een gewone biologische microscoop bestaat uit drie delen, namelijk: ① verlichtingssysteem, inclusief lichtbron en condensor; ② Optisch vergrotingssysteem, bestaande uit objectieven en oculairs, is het hoofdgedeelte van de microscoop. Om sferische aberratie en chromatische aberratie te elimineren, zijn de oculairs en objectieven samengesteld uit een complexe lensgroep; ③ mechanisch apparaat, gebruikt om het materiaal en de observatie van gemak te bevestigen.
Microscoopobject wordt duidelijk niet alleen bepaald door de vergroting, maar ook met het oplossend vermogen van de microscoop (resolutie), het oplossend vermogen verwijst naar de microscoop (of het menselijk oog van het doel 25 cm) kan het object onderscheiden met kleine intervallen van het vermogen om onderscheid de grootte van het oplossend vermogen wordt bepaald door de golflengte van het licht en de spiegelmondsnelheid en de brekingsindex van het medium, uitgedrukt in de formule:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 waarbij: n=de brekingsindex van het medium;=de spiegelmondhoek (monster op de objectieflensmond van de spanningshoek), NA=spiegelmondsnelheid (numerieke opening). De hoek van de monding van de spiegel moet altijd kleiner zijn dan 180°, dus de zui-waarde van sina/2 is noodzakelijkerwijs kleiner dan 1.
De brekingsindex van glas dat wordt gebruikt bij de productie van optische lenzen is 1,65 ~ 1,78, de brekingsindex van het gebruikte medium: hoe dichter bij het glas, hoe beter. Voor droge objectieflenzen is het medium voor lucht-spiegelmondsnelheid doorgaans 0.05 ~ 0,95; olielens met cederolie als medium, spiegelmondsnelheid kan bijna 1,5 zijn.
Gewone lichtgolflengte van 400~700 nm, dus de waarde van het oplossend vermogen van de microscoop zal niet minder zijn dan 0,2 μm, het oplossend vermogen van het menselijk oog is 0,2 mm, dus het algemene ontwerp van de microscoop zui-vergroting is meestal 1000X.
Ten tweede, laserconfocale scanmicroscoop
Laser confocale scanmicroscoop (laser confocale scanmicroscoop), met een laser als scannende lichtbron, punt voor punt, lijn voor lijn, oppervlakte voor oppervlak snelle scanning beeldvorming, scanning laser en fluorescentieverzameling van een gemeenschappelijk objectief, objectief scanning laser focuspunt , maar ook onmiddellijke beeldvorming van het objectpunt. Door de kortere golflengte van de laserstraal is de straal zeer fijn, waardoor de confocale laserscanmicroscoop een hoge resolutie heeft, ongeveer 3 maal die van een gewone optische microscoop. Het systeem wordt één keer gefocust en de scan is beperkt tot één vlak van het monster. Wanneer de scherpsteldiepte niet hetzelfde is, kunnen de beelden van verschillende diepteniveaus van het monster worden verkregen, en deze beeldinformatie wordt in de computer opgeslagen. Door middel van computeranalyse en simulatie kan het de driedimensionale structuur van het celmonster tonen .
