Debugmethoden en stappen voor fasecontrastmicroscopie
A. Gebruik op basis van het aanpassen van het Kuhler-verlichtingssysteem de helderveldmethode om het monster duidelijk scherp te stellen;
B. Draai de spotlight naar Ph1 en lijn deze uit met de schaallijn op de draaitafel. Selecteer een fasecontrastdoelstelling van 10 x en vervang deze door het transparante monster dat moet worden geobserveerd;
C. Verwijder een van de oculairs, vervang deze door een centreertelescoop en stel scherp op de twee contrastringen in het gezichtsveld (de zwarte contrastring van de objectieflens en de transmissiecontrastring van de condensorlens);
D. De twee verschilringen in het gezichtsveld vallen niet noodzakelijkerwijs samen. Pas de twee instelapparaten op de spotlight aan (pas de linker- en rechterpositie van de verschilringen aan met instelstangen en wrijvingsknoppen voor het aanpassen van de voor- en achterposities), zodat de transparante ring heen en weer beweegt om samen te vallen met de zwarte ring ;
e. Schakel na de aanpassing terug naar het observatieoculair en druk het groene filter in het optische pad om het faseverschilbeeld van het monster te observeren;
F. Bij observatie met 20 x en 40 x objectieflenzen moet de spotlight op positie Ph2 worden gezet, en bij gebruik van een 100 x objectieflens moet de spotlight op positie Ph3 worden gezet.
Toepassingsgebied: geschikt voor het observeren van transparante, ongekleurde of ongekleurde monsters, zoals verschillende cellen, levend weefsel, ongekleurde of ongekleurde weefselplakken, waterorganismen, enz.
Het basisprincipe van fasecontrastmicroscoop
Wanneer licht door een relatief transparant monster gaat, is er geen significante verandering in de golflengte (kleur) en amplitude (helderheid) van het licht. Daarom zijn bij het observeren van ongekleurde exemplaren (zoals levende cellen) onder een gewone optische microscoop de morfologie en interne structuur vaak moeilijk te onderscheiden. Vanwege de verschillen in brekingsindex en dikte van verschillende delen van de cel zullen er echter verschillen zijn in het optische pad van direct en diffractielicht wanneer het door dit monster gaat. Naarmate het optische pad groter of kleiner wordt, zal de fase van versnellende of achterblijvende lichtgolven veranderen (wat resulteert in faseverschil). Het faseverschil van licht kan niet met het blote oog worden gevoeld, maar de faseverschilmicroscoop kan zijn speciale apparaat gebruiken - een cirkelvormige opening en een faseplaat, en het interferentieverschijnsel van licht gebruiken om het faseverschil van licht om te zetten in een amplitudeverschil (licht-donkerverschil) dat door het menselijk oog kan worden waargenomen. Hierdoor vertoont het oorspronkelijk transparante object duidelijke verschillen tussen licht en donker, wordt het contrast vergroot en kunnen we levende cellen en bepaalde fijne structuren in cellen duidelijk waarnemen die niet of niet duidelijk zichtbaar zijn onder gewone optische microscopen en donkerveldmicroscopen.
Het beeldprincipe van een fasecontrastmicroscoop: de optische bron kan alleen door een transparante ring van een cirkelvormige opening gaan, die vervolgens wordt gefocusseerd in een lichtstraal. Wanneer deze lichtbundel door het te testen object gaat, ondergaat deze een verschillende mate van afwijking (diffractie) als gevolg van de verschillende optische paden van elk onderdeel. Vanwege het feit dat het door de transparante ring gevormde beeld samenvalt met het conjugaatoppervlak op de faseplaat en het brandpuntsvlak achter de objectieflens. Daarom gaat direct licht dat niet is afgeweken door het geconjugeerde oppervlak, terwijl afgebogen licht dat is afgeweken door het compenserende oppervlak gaat. Vanwege de verschillende eigenschappen van het conjugaatoppervlak en het compensatieoppervlak op de faseplaat zullen ze respectievelijk een bepaald faseverschil en intensiteitsreductie genereren van het licht dat door deze twee delen gaat. De twee sets licht zullen dan convergeren door de achterste lens en zich op hetzelfde optische pad voortbewegen, waardoor interferentie ontstaat tussen direct en diffractielicht, waardoor het faseverschil in amplitudeverschil verandert. Op deze manier wordt tijdens fasecontrastmicroscopie het faseverschil dat niet door het menselijk oog kan worden onderscheiden, omgezet in een amplitudeverschil (helderheidsverschil) dat door het licht van een kleurloos transparant lichaam door het menselijk oog kan worden onderscheiden.
