Bepaling van het aantal micro-organismen - Microscopische directe telmethode!
De groei van de bacteriepopulatie manifesteert zich door een toename van het aantal cellen of een toename van celmateriaal. Methoden voor het bepalen van het aantal cellen omvatten directe microscopische telling, plaattelling, troebelheidsschatting door spectrofotometer, meest waarschijnlijke aantal MPN en membraanfiltratie. (membraanfiltratie) enz. Methoden voor het meten van cellulaire stoffen omvatten de bepaling van het droge gewicht van de cel, de bepaling van bepaalde celcomponenten zoals het stikstofgehalte, het RNA- en DNA-gehalte, en de bepaling van metabolietenproducten. Kortom, er zijn veel methoden om de microbiële groei te meten, elk met zijn eigen voor- en nadelen. De methode moet worden geselecteerd op basis van de specifieke vereisten van het werk. Dit experiment introduceert voornamelijk de directe telmethode onder de microscoop die vaak wordt gebruikt bij productie- en wetenschappelijk onderzoekswerk.
1. Doelvereisten
1. Verduidelijk het principe van tellen met een bloedceltelbord.
2. Beheers de methode voor het tellen van micro-organismen met behulp van een bloedceltelbord.
2. Basisprincipes
Microscoop directe telmethode is een eenvoudige, snelle en intuïtieve methode waarbij een kleine hoeveelheid suspensie van het te testen monster op een speciaal objectglaasje met een bepaald oppervlak en volume (ook wel bacteriometer genoemd) wordt geplaatst en direct onder een microscoop wordt geteld. Methoden. Tot de momenteel veelgebruikte bacteriometers in binnen- en buitenland behoren: hemocytometer, Peteroff-Hauser-bacteriometer en Hawksley-bacteriometer, enz. Ze kunnen allemaal worden gebruikt om gist, bacteriën, schimmelsporen en andere suspensies te tellen, en de basisprincipes zijn hetzelfde. De laatste twee bacterietellers hebben een totaal volume van 0.02 mm3 nadat ze zijn afgedekt met een dekglas, en de afstand tussen het dekglas en het objectglaasje bedraagt slechts 0,02 mm. Daarom kan een objectieflens voor olie-immersie worden gebruikt om kleinere cellen zoals bacteriën waar te nemen en te detecteren. graaf. Naast het gebruik van deze bacteriometers bestaat er ook een schattingsmethode waarbij onder een microscoop direct de verhouding tussen het uitstrijkoppervlak en het gezichtsveld wordt waargenomen. Deze methode wordt doorgaans gebruikt voor bacteriologisch onderzoek van melk. De voordelen van de directe telmethode van de microscoop zijn dat deze intuïtief, snel en eenvoudig te bedienen is. Het nadeel van deze methode is echter dat het meetresultaat meestal de som is van dode bacteriën en levende bacteriën. Er zijn momenteel enkele methoden om deze tekortkoming te ondervangen, zoals het combineren van levensvatbare bacteriën die de microkamercultuur kleuren (korte tijd) en het toevoegen van celdelingsremmers om het doel te bereiken om alleen levensvatbare bacteriën te tellen.
Dit experiment gebruikt een hemocytometer als voorbeeld om directe tellingen onder een microscoop uit te voeren. Voor het gebruik van de andere twee bacteriometers verwijzen wij u naar de instructies van elke fabrikant. Direct tellen onder een microscoop met behulp van een hemocytometer is een veelgebruikte microbiële tellingsmethode. Het telbord is een speciale glijbaan met vier groeven die drie platforms vormen; het bredere platform in het midden is door een korte horizontale groef in twee helften verdeeld, en aan elke kant van het platform bevindt zich een roosterrooster. Elk vierkant raster is verdeeld in negen grote vierkanten, en het grote vierkant in het midden is de telkamer. De structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen wordt weergegeven in figuur {{0}}. Er zijn over het algemeen twee specificaties voor de schaal van de telkamer. De ene is een groot vierkant verdeeld in 25 middelgrote vierkanten, en elk middelgroot vierkant is verdeeld in 16 kleine vierkanten (Figuur 15-2); de andere is een groot vierkant. Het vierkante raster is verdeeld in 16 middelgrote vierkanten, en elk middelgroot vierkant is verdeeld in 25 kleine vierkanten. Maar wat voor soort telbord het ook is, er zijn 400 kleine vierkantjes in elk groot vierkant. De zijdelengte van elk groot vierkant is lmm, en de oppervlakte van elk groot vierkant is lmm2. Nadat het dekglaasje is afgedekt, bedraagt de hoogte tussen het dekglaasje en het glaasje 0,lmm, waardoor het volume van de telkamer 0,lmm3 (een tienduizendste milliliter) bedraagt. Figuur 15-1 Structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen (1) Figuur 15-2 Structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen (2) A. Vooraanzicht; B. Lengtedoorsnede; vergroot vierkant raster, het grote vierkant in het midden is de telkamer 1. Bloedcellentelbord; 2. Dekglaasje; 3. Tel bij het tellen in de telkamer meestal het totale aantal bacteriën in vijf vierkanten, bepaal vervolgens de gemiddelde waarde van elk vierkant en vermenigvuldig dit vervolgens met 25 of 16 om het totale aantal bacteriën in een groot vierkant te krijgen. in het totale aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing. Stel dat het totale aantal bacteriën in de vijf middelste vierkantjes A is, en de verdunningsfactor van de bacteriële oplossing B. Als het een telplaat is met 25 middelste vierkantjes, dan is het totale aantal bacteriën in 1 ml van de bacteriële oplossing {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (stuks) Op dezelfde manier, als het een telplaat is met 16 vierkantjes, het totale aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (stuks),,
