Verschil tussen fluorescentiemicroscoop en laserconfocale microscoop
fluorescente microscoop
1. De fluorescentiemicroscoop gebruikt ultraviolet licht als lichtbron, dat wordt gebruikt om het gedetecteerde object te bestralen om het fluorescentie te laten uitzenden, en vervolgens de vorm en positie van het object onder de microscoop te observeren. Fluorescentiemicroscoop wordt gebruikt om de absorptie, het transport, de distributie en de locatie van chemische stoffen in cellen te bestuderen. Sommige stoffen in cellen, zoals chlorofyl, kunnen fluoresceren nadat ze zijn bestraald met ultraviolette straling; Andere stoffen kunnen niet uit zichzelf fluoresceren, maar kunnen wel fluoresceren nadat ze zijn geverfd met fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende antilichamen en zijn bestraald met ultraviolette straling. Fluorescentiemicroscoop is een van de hulpmiddelen voor kwalitatief en kwantitatief onderzoek naar deze stoffen.
2, fluorescentiemicroscoopprincipe:
(a) Lichtbron: De lichtbron straalt licht uit met verschillende golflengten (van ultraviolet tot infrarood).
(b) Lichtbron van excitatiefilter: licht uitzenden met een specifieke golflengte waardoor het monster kan fluoresceren, terwijl licht wordt geblokkeerd dat nutteloos is voor excitatiefluorescentie.
(c) Fluorescerende monsters: doorgaans gekleurd met fluorescerende pigmenten.
(d) Blokkeerfilter: blokkeert excitatielicht dat niet door het monster wordt geabsorbeerd om selectief fluorescentie door te laten, en sommige golflengten in de fluorescentie worden ook selectief doorgelaten. Een microscoop die ultraviolet licht als lichtbron gebruikt om het bestraalde object fluorescentie te laten uitzenden. De elektronenmicroscoop werd voor het eerst geassembleerd door Knohl en Ha Roska in Berlijn in 1931. Deze microscoop maakt gebruik van een snelle elektronenbundel in plaats van een lichtbundel. Omdat de golflengte van de elektronenstroom veel korter is dan die van de lichtgolf, kan de vergroting van de elektronenmicroscoop 800 duizend keer bedragen, en de minimale resolutielimiet is 0,2 nanometer. De rasterelektronenmicroscoop, die in 1963 in gebruik werd genomen, kan mensen de kleine structuren op het oppervlak van objecten laten zien.
3. Toepassingsgebied: gebruikt om het beeld van kleine voorwerpen te vergroten. Het wordt over het algemeen toegepast op de observatie van biologie, geneeskunde en microscopische deeltjes.
Confocale microscoop
1. Confocale microscoop voegt een semi-reflecterende halve lens toe aan het optische pad van gereflecteerd licht, die het gereflecteerde licht dat door de lens is gegaan in andere richtingen breekt. In het brandpunt bevindt zich een schot met een gaatje, en het gaatje bevindt zich in het brandpunt. Achter het schot bevindt zich een fotomultiplicatorbuis. Men kan zich voorstellen dat het gereflecteerde licht voor en na de focus van het detectielicht door dit confocale systeem gaat en niet op het kleine gaatje wordt gefocust, maar door het schot wordt geblokkeerd. De fotometer meet dus de intensiteit van het gereflecteerde licht in het brandpunt.
2. Principe: De traditionele optische microscoop gebruikt de veldlichtbron en het beeld van elk punt op het monster zal worden verstoord door de diffractie of het verstrooide licht van de aangrenzende punten; De laserscanning-confocale microscoop scant elk punt van het brandpuntsvlak in het monster met behulp van de puntlichtbron die wordt gevormd door de laserstraal die door het verlichtingsgaatje gaat. Het bestraalde punt op het monster wordt afgebeeld bij het detectiegaatje, dat punt voor punt of lijn voor punt wordt ontvangen door een fotomultiplicatorbuis (PMT) of een koudgekoppeld apparaat (cCCD) na detectie van het gaatje, en er wordt snel een fluorescerend beeld gevormd op het monster. het computermonitorscherm. Het verlichtingsgaatje en het detectiegaatje zijn geconjugeerd ten opzichte van het brandpuntsvlak van de objectieflens, en de punten op het brandpuntsvlak concentreren zich tegelijkertijd op het verlichtingsgaatje en het emissiegaatje, en de punten buiten het brandpuntsvlak zullen dat niet doen. worden afgebeeld bij het detectiegaatje, zodat het verkregen confocale beeld de optische dwarsdoorsnede van het monster is, wat het defect van een wazig beeld van de gewone microscoop overwint.
3. Toepassingsgebieden: geneeskunde, dier- en plantenonderzoek, biochemie, bacteriologie, celbiologie, weefsels en embryo's, voedingswetenschappen, genetica, farmacologie, fysiologie, optica, pathologie, plantkunde, neurowetenschappen, mariene biologie, materiaalkunde, elektronische wetenschap, mechanica, petroleumgeologie en mineralogie.
