Het uitbreiden van de voordelen van multiphoton laserscanmicroscopie om op te nemen
Laserscanning multiphoton microscoop is een significante verbetering van optische microscopie, voornamelijk gemanifesteerd in het vermogen om diepe structuren van levende cellen, vaste cellen en weefsels te observeren, en heldere en scherpe meerlagige z-vlak structuren te verkrijgen, namelijk optische plakjes, die kunnen worden gebruikt om driedimensionale vaste structuren van specimens te construeren. Confocale microscoop maakt gebruik van een laserlichtbron, die wordt uitgebreid om het gehele brandvlak van de objectieve lens te vullen en vervolgens in zeer kleine punten op het focale vlak van het monster door het lenssysteem van de objectieve lens te worden samengesteld. Volgens de numerieke opening van de objectieve lens is de diameter van het heldere verlichtingspunt ongeveer 0. 25-0. 8 μm, en de diepte is ongeveer 0. 5-1. 5 μm. De grootte van het confocale punt wordt bepaald door het microscoopontwerp, lasergolflengte, objectieve kenmerken, statusinstellingen van scaneenheid en monster -eigenschappen. Het verlichtingsbereik en de diepte van een veldmicroscoop zijn groot, terwijl de verlichting van een confocale microscoop is gericht op een brandpunt op het brandvlak. Het basisvoordeel van confocale microscopie is dat het fijne optische secties kan uitvoeren op dikke fluorescerende monsters (tot 5 0 μm of meer), met een dikte van ongeveer 0,5 tot 1,5 μm. De reeks optische plakbeelden kan worden verkregen door het monster op en neer te bewegen met behulp van de z-asstapmotor van de microscoop. Het verzamelen van beeldinformatie wordt bestuurd binnen het * * vlak, zonder interferentie van signalen die zijn uitgestoten vanuit andere posities op het monster. Na het verwijderen van de invloed van achtergrondfluorescentie en het vergroten van de signaal-ruisverhouding, zijn het contrast en de resolutie van confocale beelden aanzienlijk verbeterd in vergelijking met traditionele fluorescentiebeelden voor veldverlichting. In veel monsters verweven ingewikkelde structurele componenten om complexe systemen te vormen, maar zodra er voldoende optische secties kunnen worden verzameld, kunnen we software gebruiken om ze in drie dimensies te reconstrueren. Deze experimentele methode is veel gebruikt in biologisch onderzoek om de complexe structurele en functionele relaties tussen cellen of weefsels op te helderen.
