Fluorescentiemicroscoop en gewone optische microscoopverschillen en kenmerken
Fluorescentiemicroscoop en gewone optische microscoop zijn verschillend. Het is niet door de verlichting van de gewone lichtbron om het monster te observeren, maar door het gebruik van een bepaalde golflengte van licht (meestal ultraviolet, blauwviolet licht) excitatie van fluorescerend materiaal in het monster onder de microscoop, zodat de fluorescentie van de lichtbron van de fluorescentiemicroscoop geen directe verlichting speelt, maar als een soort excitatie van fluorescerend materiaal in het monster van de energiebron. De reden waarom we het monster kunnen observeren is niet te wijten aan de verlichting van de lichtbron, maar aan het fluorescentieverschijnsel dat wordt gepresenteerd door het fluorescerende materiaal in het monster na het absorberen van de lichtenergie van excitatie. Het is te zien dat de kenmerken van de fluorescentiemicroscoop, voornamelijk de lichtbron, een groot aantal specifieke golflengtegebieden van het excitatielicht kunnen leveren, zodat het fluorescerende materiaal in het onderzochte monster de noodzakelijke intensiteit van het excitatielicht kan verkrijgen. Tegelijkertijd moet de fluorescentiemicroscoop over een bijbehorend filtersysteem beschikken. De fluorescentiemicroscoop is het basisinstrument voor fluorescentiehistochemie. Het is samengesteld uit een ultrahogedruklichtbron, een filtersysteem (inclusief excitatie- en onderdrukkingsfilterplaat), een optisch systeem en een fotografisch systeem en andere belangrijke componenten. Het is het gebruik van een bepaalde golflengte van licht om het monster te stimuleren fluorescentie uit te zenden.
1. de manier van fluorescentie-excitatie: volgens het golflengtebereik van licht is verdeeld in UV-excitatiemethode (met behulp van ultraviolette verlichting) en BV-excitatiemethode (met behulp van blauwviolet licht). Twee soorten UV-excitatiemethoden zijn korter dan 400 nm nabij ultraviolet licht voor opwinding. Bij deze methode is er geen zichtbaar excitatielicht, dus de waargenomen fluorescentie toont de inherente fluorescentie van de kleurstof, en het is gemakkelijk om de specifieke fluorescentie op het monster te onderscheiden van de zelffluorescentie van het achtergrondweefsel.
2. BV-excitatiemethode: De methode is gecentreerd op 404 nm, 434 nm van ultraviolet naar blauw licht voor excitatie. Deze methode maakt gebruik van blauw licht om het monster te bestralen, dus het afsnijfilter van het fluorescentieobservatiesysteem moet een filter gebruiken dat het blauwe licht volledig kan blokkeren en de gewenste groene en gele fluorescentie voldoende kan doorlaten. Fluorescerende pigmenten voor de fluorescerende antilichaammethode. Omdat de golflengte van de maximale absorptie van het excitatielicht en de golflengte van de maximale emissie van de fluorescentie dicht bij elkaar liggen, moeten de filters die bij de BV-excitatiemethode worden gebruikt scherpe afsnijfilters zijn. Deze methode gebruikt blauw licht als excitatielicht, waardoor de absorptie-efficiëntie van het fluorochroom hoger is en een helderder beeld kan worden verkregen. Het nadeel is dat fluorescentie onder 500 nm niet zichtbaar is en boven 500 nm het hele beeld geel lijkt. Bij de fluorescerende antilichaammethode wordt het grootste deel van de specificiteit beoordeeld aan de hand van de unieke kleur van het fluorochroom, dus de nadelen van de hierboven beschreven BV-excitatiemethode hebben de neiging extreem invloedrijk te zijn bij het bespreken van subtiele specificiteit.
