Fluorescentiemicroscopen kunnen worden onderverdeeld in twee typen volgens het optische padprincipe:
1. Transmissie fluorescentiemicroscoop
Oudere fluorescentiemicroscopen gebruiken een schijnwerpers om fluorescentie te prikkelen door de excitatielichtbron door het monstermateriaal te geven. Het voordeel is een sterke fluorescentie bij lage vergroting, maar het nadeel is dat de fluorescentie ervan afneemt met toenemende vergroting. Het is dus alleen geschikt voor het observeren van grotere specimenmaterialen.
2. Falling Light Fluorescention Microscope
Het excitatielicht valt naar beneden van de objectieve lens op het oppervlak van het monster, met dezelfde objectieve lens als de verlichtingscondensor en de objectieve lens voor het verzamelen van fluorescentie.
Een dubbele kleurstraalsplitser (dichroïsche spiegel) moet worden toegevoegd aan het optische pad, dat een hoek van 45 graden met de optische as vormt. Het excitatielicht wordt gereflecteerd in de objectieve lens en gericht op het monster. De fluorescentie gegenereerd door het monster, evenals het excitatielampje dat wordt gereflecteerd van het oppervlak van de objectieve lens en het dekglas, voer de objectieve lens tegelijkertijd in en keer terug naar de dubbele kleurbundelsplitter om het excitatielampje en de fluorescentie te scheiden. Het resterende excitatielicht wordt vervolgens geblokkeerd door de filterabsorptie. Als verschillende combinaties van excitatiefilters, dubbele kleurbalkafscheiders en blokkeerfilters worden gebruikt, kunnen ze voldoen aan de behoeften van verschillende fluorescerende reactieproducten.
De voordelen van deze fluorescentiemicroscoop zijn uniforme veldverlichting, duidelijke beeldvorming en sterkere fluorescentie met een grotere vergroting.
3. Fasecontrastmicroscoop
Fase -contrastmicroscoop is een microscoop die het faseverschil (of optische padverschil) kan omzetten wanneer licht door een object doorgaat in amplitude (lichtintensiteit) veranderingen. Voornamelijk gebruikt voor het observeren van levende cellen, niet -gekleurde weefselsecties of gekleurde monsters zonder contrast.
Het menselijk oog kan alleen veranderingen in de golflengte (kleur) en amplitude van zichtbaar licht onderscheiden, maar kan geen veranderingen in fase onderscheiden. De meeste biologische monsters zijn zeer transparant en de amplitude van lichtgolven blijft in principe ongewijzigd na het passeren, met alleen faseveranderingen.
De fasecontrastmicroscoop zet in wezen het optische padverschil om van zichtbaar licht dat door het monster stroomt in amplitudeverschil, waardoor het contrast tussen verschillende structuren wordt verbeterd en duidelijk en zichtbaar wordt gemaakt. Na het door het monster te zijn gegaan, ondergaat het licht breking, afwijkt van het oorspronkelijke optische pad en wordt vertraagd door 1/4 λ (golflengte). Als het optische padverschil wordt verhoogd of verlaagd met nog een 1/4 λ, wordt het optische padverschil 1/2 λ en neemt de interferentie tussen de twee lichtstralen toe of neemt af nadat de as is gecombineerd, waardoor het contrast wordt verbeterd.
