Detectiemethode voor fluorescentiemicroscopie
fluorescentie microscoop
Fluorescentiemicroscopie is een fundamenteel hulpmiddel voor immunofluorescentiecytochemie. Het is samengesteld uit hoofdcomponenten zoals een lichtbron, een filterplaatsysteem en een optisch systeem. Het maakt gebruik van een bepaalde golflengte van licht om het monster te prikkelen en fluorescentie uit te zenden, die wordt vergroot door een objectief- en oculairsysteem om het fluorescentiebeeld van het monster te observeren (Figuur 1).
(1) Lichtbron
Tegenwoordig wordt doorgaans een ultrahogedrukkwiklamp van 200 W als lichtbron gebruikt. Het is gemaakt van kwartsglas, met een bolvorm in het midden en een bepaalde hoeveelheid kwik aan de binnenkant. Tijdens bedrijf zorgt de ontlading tussen de twee elektroden ervoor dat het kwik verdampt en de druk in de bol snel toeneemt. Wanneer het kwik volledig verdampt, kan het een standaard atmosferische druk van 50-70 bereiken, wat doorgaans ongeveer 5-15 minuten duurt. De luminescentie van ultrahogedrukkwiklampen is het resultaat van de ontlading tussen elektroden, die voortdurend kwikmoleculen dissocieert en reduceert en fotonen uitzendt. Het zendt sterk ultraviolet en blauwviolet licht uit, wat voldoende is om verschillende fluorescerende stoffen te exciteren. Daarom wordt het veel gebruikt in fluorescentiemicroscopen.
Voorzorgsmaatregelen voor het gebruik van een fluorescentiemicroscoop
(1) Volg strikt de instructies van de fluorescentiemicroscoopfabriek en verander het programma niet willekeurig.
(2) Inspectie moet worden uitgevoerd in een donkere kamer. Nadat u de donkere kamer bent binnengegaan, sluit u de stroom aan en steekt u de ultrahogedrukkwiklamp 5-15 minuten aan. Nadat de lichtbron sterk licht uitzendt en zich stabiliseert, moeten de ogen zich volledig aanpassen aan de donkere kamer voordat ze het monster gaan observeren.
(3) Om UV-schade aan de ogen te voorkomen, moet bij het afstellen van de lichtbron een veiligheidsbril worden gedragen.
(4) De inspectietijd moet elke keer 1-2 uur bedragen. Als deze langer dan 90 minuten duurt, neemt de lichtsterkte van de ultrahogedrukkwiklamp geleidelijk af en verzwakt de fluorescentie; Monsters blootgesteld aan ultraviolette straling gedurende 3-5 dagen
Na min nam de fluorescentie ook aanzienlijk af; De maximale duur mag dus niet langer zijn dan 2-3 uur.
(5) De levensduur van de lichtbron van de fluorescentiemicroscoop is beperkt en het monster moet centraal worden onderzocht om tijd te besparen
Bespaar tijd en bescherm de lichtbron. Als het warm weer is, moet een elektrische ventilator worden toegevoegd om de warmte af te voeren en af te koelen. Bij het vervangen van een nieuwe lamp moet de gebruikstijd vanaf het begin worden geregistreerd. Wanneer de lamp is uitgeschakeld en u deze weer wilt gebruiken, moet u wachten tot de lamp voldoende is afgekoeld voordat u deze aansteekt. Vermijd het meerdere keren per dag aansteken van de lichtbron.
(6) Observeer het monster onmiddellijk na het kleuren, aangezien de fluorescentie na verloop van tijd geleidelijk zal verzwakken. Als het monster in een polyethyleen plastic zak bij 4 graden wordt bewaard, kan dit de fluorescentieverzwakkingstijd vertragen en de verdamping van het bevestigingsmiddel voorkomen.
(7) De beoordelingscriteria voor de helderheid van de fluorescentie zijn over het algemeen verdeeld in vier niveaus, namelijk "één" - geen of zichtbare zwakke fluorescentie. "+" - Alleen zichtbare fluorescentie is zichtbaar. ++- Zichtbaar met heldere fluorescentie. "+++" - Zichtbare en oogverblindende fluorescentie.
