Fluorescentiewaarneming van optische microscoop
Fluorescentie verwijst naar het proces waarbij een fluorescerende stof bijna gelijktijdig licht met een langere golflengte uitzendt wanneer het wordt bestraald met licht van een specifieke golflengte (figuur 1). Wanneer licht van een specifieke golflengte (excitatiegolflengte) een molecuul treft, zoals die in een fluorofoor, wordt de fotonenergie geabsorbeerd door de elektronen van het molecuul. Vervolgens gaan de elektronen over van de grondtoestand (S0) naar een hoger energieniveau, de aangeslagen toestand (S1'). Dit proces wordt excitatie① genoemd. Het elektron blijft 10-9–10-8 seconden in de aangeslagen toestand, waarin het elektron wat energie verliest②. Tijdens het proces waarbij elektronen de aangeslagen toestand (S1) verlaten en terugkeren naar de grondtoestand③, komt de resterende energie die tijdens het excitatieproces is geabsorbeerd vrij.
Fluorescerend Jablonski-diagram
De verblijftijd van het fluorescerende molecuul in de aangeslagen toestand is de levensduur van de fluorescentie, die over het algemeen op het niveau van nanoseconden ligt, en is een inherent kenmerk van het fluorescerende molecuul zelf. Fluorescentie Lifetime Imaging (FLIM), dat gebruikmaakt van fluorescentielevensduurbeeldvormingstechnologie, kan meer diepgaande functionele metingen uitvoeren naast fluorescentie-intensiteitsbeeldvorming, en moleculaire conformatie, intermoleculaire interacties en de micro-omgeving van moleculen, enz. verkrijgen met conventionele optische beeldvorming.
Een andere belangrijke eigenschap van fluorescentie is de Stokes-verschuiving, het golflengteverschil tussen de excitatie- en emissiepieken (Figuur 2). Typisch is de emissiegolflengte langer dan de excitatiegolflengte. Dit komt omdat elektronen een deel van hun energie verliezen door het relaxatieproces nadat de fluorescerende stof is aangeslagen en voordat fotonen vrijkomen. Fluorescerende stoffen met grotere Stokes-verschuivingen zijn gemakkelijker waar te nemen onder een fluorescentiemicroscoop.
fluorescentie microscoop
Fluorescentiemicroscoop is een optische microscoop die fluorescentie-eigenschappen gebruikt voor observatie en beeldvorming, en wordt veel gebruikt op verschillende gebieden, zoals celbiologie, neurobiologie, plantkunde, microbiologie, pathologie en genetica. Fluorescentiebeeldvorming heeft de voordelen van hoge gevoeligheid en hoge specificiteit, en is zeer geschikt voor de observatie van de verdeling van specifieke eiwitten en organellen in weefsels en cellen, de studie van colokalisatie en interactie, het volgen van levensdynamische processen zoals veranderingen in ionenconcentratie , enz.
De meeste moleculen in cellen fluoresceren niet, en als je ze wilt zien, label je ze fluorescerend. Er zijn veel methoden voor fluorescerende labeling, zoals directe labeling (zoals het gebruik van DAPI om DNA te labelen), of immunokleuring met behulp van de antigeenbindende eigenschappen van antilichamen, of het gebruik van fluorescerende eiwitten (zoals GFP, groen fluorescerend eiwit) om doeleiwitten te labelen , en omkeerbare binding. synthetische kleurstoffen (zoals Fura-2), enz.
Omgekeerde fluorescentiemicroscoop MF53-N
Op dit moment is de fluorescentiemicroscoop de standaard beeldvormingsapparatuur geworden van verschillende laboratoria en beeldvormingsplatforms en is het een goede hulp voor onze dagelijkse experimenten. Fluorescentiemicroscopen worden grofweg onderverdeeld in drie categorieën: rechtopstaande fluorescentiemicroscopen (geschikt voor coupes), omgekeerde fluorescentiemicroscopen (geschikt voor levende cellen, rekening houdend met coupes), fluorescerende stereoscopen (geschikt voor grotere exemplaren, zoals planten, zebravissen (volwassen/embryo ), medaka, organen van muizen/ratten, enz.).
Fluorescentiemicroscopie beeldvormingstechnologie wordt veel gebruikt en is rijk aan typen, en nieuwe technologieën zijn nog steeds in opkomst. U kunt de technologie kiezen om uw eigen onderzoek te voltooien.
