Hoe fluorescentiemicroscopie verschilt van confocale lasermicroscopie
Fluorescentie microscoop
1. Een fluorescentiemicroscoop gebruikt ultraviolet licht als lichtbron om het te inspecteren object te verlichten, zodat het fluorescentie uitstraalt, en vervolgens de vorm en locatie van het object onder de microscoop te observeren. Met fluorescentiemicroscopie wordt de opname en het transport van stoffen in cellen bestudeerd, evenals de distributie en positionering van chemische stoffen. Sommige stoffen in cellen, zoals chlorofyl, kunnen fluoresceren nadat ze zijn bestraald met ultraviolette straling; sommige stoffen kunnen zelf niet fluoresceren, maar als ze worden gekleurd met fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende antilichamen, kunnen ze wel fluoresceren na bestraling met ultraviolette straling. Fluorescentiemicroscopie is een van de instrumenten voor kwalitatief en kwantitatief onderzoek naar dergelijke stoffen.
2. Principe van fluorescentiemicroscoop:
(A) Lichtbron: De lichtbron straalt licht uit met verschillende golflengten (van ultraviolet tot infrarood).
(B) Lichtbron van excitatiefilter: zendt licht uit met een specifieke golflengte waardoor het monster kan fluoresceren, terwijl het licht blokkeert dat nutteloos is voor het stimuleren van fluorescentie.
(C) Fluorescerende monsters: doorgaans gekleurd met fluorescerende pigmenten.
(D) Blokkeerfilter: blokkeert het excitatielicht dat niet door het monster wordt geabsorbeerd en selectief fluorescentie doorlaat. Sommige golflengten in de fluorescentie worden ook selectief doorgelaten. Een microscoop die ultraviolet licht als lichtbron gebruikt om het verlichte voorwerp te laten fluoresceren. De elektronenmicroscoop werd voor het eerst geassembleerd in 1931 in Berlijn, Duitsland door Knorr en Hallowska. Deze microscoop maakt gebruik van een snelle elektronenstraal in plaats van een lichtstraal. Omdat de golflengte van de elektronenstroom veel korter is dan die van licht, kan de vergroting van de elektronenmicroscoop 800,000 keer bereiken, en de minimale resolutielimiet is 0,2 nanometer. Met de scanning-elektronenmicroscoop, die in 1963 in gebruik werd genomen, kunnen mensen de kleine structuren op het oppervlak van objecten zien.
3. Toepassingsgebied: wordt gebruikt om afbeeldingen van kleine objecten te vergroten. Over het algemeen gebruikt bij de observatie van biologie, geneeskunde, microscopische deeltjes, enz.
confocale microscoop
1. De confocale microscoop voegt een semi-reflecterende halve lens toe aan het optische pad van het gereflecteerde licht, dat het gereflecteerde licht dat door de lens is gegaan in andere richtingen breekt. Er is een schot met een gaatje in het brandpunt, en het gaatje bevindt zich. In het brandpunt, achter het schot, bevindt zich een fotomultiplicatorbuis. Men kan zich voorstellen dat het gereflecteerde licht vóór en na de detectielichtfocus door dit confocale systeem gaat en niet op het kleine gaatje kan worden scherpgesteld, en door het schot wordt geblokkeerd. Wat de fotometer dus meet, is de intensiteit van het gereflecteerde licht in het brandpunt.
2. Principe: Traditionele optische microscopen maken gebruik van veldlichtbronnen en het beeld van elk punt op het preparaat wordt verstoord door diffractie of verstrooid licht van aangrenzende punten; confocale laserscanningmicroscopen gebruiken laserstralen om puntlichtbronnen te vormen door middel van verlichtende gaatjes om de binnenkant van het monster te verlichten. Elk punt van het brandpuntsvlak wordt gescand en het verlichte punt op het monster wordt afgebeeld bij het detectiegaatje, dat punt voor punt of lijn voor lijn wordt ontvangen door de fotomultiplicatorbuis (PMT) of het koude koppelingsapparaat (cCCD) achter de detectie gaatje, en er ontstaat snel een fluorescerend beeld op het beeldscherm van de computer. Het verlichtingsgaatje en het detectiegaatje zijn geconjugeerd ten opzichte van het brandpuntsvlak van de objectieflens. Punten op het brandpuntsvlak zijn tegelijkertijd scherpgesteld op het verlichtingsgaatje en het emissiegaatje. Punten buiten het brandpuntsvlak worden niet afgebeeld bij het detectiegaatje. Dit wordt verkregen. Confocale beelden zijn optische dwarsdoorsneden van specimens, waardoor de tekortkomingen van wazige beelden in gewone microscopen worden overwonnen.
3. Toepassingsgebieden: geneeskunde, dier- en plantenwetenschappelijk onderzoek, biochemie, bacteriologie, celbiologie, weefselembryologie, voedingswetenschappen, genetica, farmacologie, fysiologie, optica, pathologie, plantkunde, neurowetenschappen, mariene biologie en materiaalkunde, elektronische wetenschap , mechanica, petroleumgeologie, mineralogie.
