Beeldvormingsmethoden voor heldere en donkere velden van fluorescentiemicroscopie
(1) Bright field imaging (BFI), waarbij alleen de uitgezonden elektronen in het paraxiale gebied door de objectiefopening kunnen gaan, waardoor een donker beeld op een heldere achtergrond ontstaat. Hoe kleiner de opening van de objectieflens, hoe groter het contrast van het helderveldbeeld; (2) Donkerveldbeeldvorming (DFI), waarbij slechts een deel van een verstrooide bundel met een grote hoek of een diffractiebundel van een kristal door de lensopening van het objectief kan gaan, terwijl de doorgelaten bundel wordt geblokkeerd. Hierdoor ontstaat een helder grafisch beeld op een donkere achtergrond. Deze donkerveldbeeldvormingsmethode kan het contrast van beelden verbeteren en is een belangrijke beeldvormingsmethode.
Er zijn grofweg vier methoden voor fluorescentiemicroscopie om donkerveldbeeldvorming te bereiken: (1) het handhaven van verticale verlichting langs de optische as terwijl de objectiefopening wordt verplaatst; (2) Het gebruik van schuine verlichting om verstrooide bundels in de richting van de optische as te verkrijgen wordt Center Dark Field Imaging (CDFI) genoemd; (3) Een objectieflensopening met een centrale bundelblokkering en een cirkelvormig transparant gebied; (4) Gebruik een ronde transparante spot om licht te detecteren en een objectiefopening met een centraal rond gat. De * methoden hier zijn eenvoudig en handig, maar maken gebruik van elektronische beeldvorming in het verre mouwgebied, wat resulteert in grote aberraties en een slechte beeldkwaliteit. De tweede methode kan de bovenstaande nadelen vermijden, maar de objectieve opening van de Leica-fluorescentiemicroscoop ontvangt slechts een klein deel van de verstrooide afgebogen elektronen, wat resulteert in een lagere efficiëntie. De zijkant van de opening wordt vaak gebombardeerd door een groot aantal elektronen, wat gemakkelijk asymmetrische vervuiling kan veroorzaken en de beeldkwaliteit kan beïnvloeden. Het cirkelvormige objectief is in dit opzicht verbeterd, maar het nadeel is dat het moeilijk te maken is en het moeilijk is om volledige axiale symmetrie te bereiken. Gegeven de relatief ontspannen eisen aan het verlichtingssysteem, kan de laatste oplossing worden toegepast, waarbij een cirkelvormige opening aan de condensor wordt toegevoegd om holle verlichting voor het monster te verschaffen. Het effect van dit apparaat. De beeldresolutie kan dicht bij die van helderveldbeelden liggen, terwijl het contrast aanzienlijk wordt verbeterd.
