Verbeterde voordelen van multifotonmicroscopie met laserscannen
Laserscannende multifotonmicroscopie is een belangrijke verbetering van optische microscopie, voornamelijk voor het observeren van de diepe structuur van levende cellen, vaste cellen en weefsels, en kan heldere en scherpe meerlaagse Z-vlakstructuren verkrijgen, dat wil zeggen optische plakjes, en kan construeren De driedimensionale vaste structuur van het monster. De confocale microscoop maakt gebruik van een laserlichtbron, die wordt uitgezet om het gehele achterste brandpuntsvlak van de objectieflens te vullen, en vervolgens via het lenssysteem van de objectieflens convergeert naar een zeer klein punt op het brandpuntsvlak van het monster. Afhankelijk van de numerieke opening van de objectieflens is de diameter van het helderste verlichtingspunt ongeveer 0.25 ~ 0.8 μm, en de diepte ongeveer 0.5 ~ 1.5 urn De grootte van de confocale vlek hangt af van het ontwerp van de microscoop, de lasergolflengte, de kenmerken van de objectieflens, de toestandsinstelling van de scaneenheid en de aard van het preparaat. Veldmicroscopen hebben een groot bereik en een grote verlichtingsdiepte, terwijl confocale microscopen de verlichting geconcentreerd hebben in een brandpunt op het brandpuntsvlak. Het meest fundamentele voordeel van confocale microscopie is dat het fijne optische secties kan uitvoeren van dikke fluorescerende monsters (tot 50 μm of meer), met een dikte van ongeveer 0,5 tot 1,5 μm. Een reeks optische doorsnedebeelden kan worden verkregen door het preparaat op en neer te bewegen met de Z-as-stappenmotor van de microscoop. De verwerving van beeldinformatie wordt binnen een nauwkeurig vlak geregeld en wordt niet verstoord door signalen van andere locaties op het preparaat. Na het verwijderen van het effect van achtergrondfluorescentie en het verhogen van de signaal-ruisverhouding, zijn het contrast en de resolutie van confocale beelden aanzienlijk verbeterd vergeleken met traditionele fluorescentiebeelden met veldverlichting. In veel exemplaren zijn veel ingewikkelde structurele componenten met elkaar verweven om complexe systemen te vormen, maar zodra er voldoende optische secties kunnen worden verzameld, kunnen we ze via software in 3D reconstrueren. Deze experimentele aanpak is op grote schaal gebruikt in biologisch onderzoek om de complexe structurele en functionele relaties tussen cellen of weefsels op te helderen.
