Inleiding tot multiphoton-laserscanmicroscopie: voor- en nadelen
1. Opgewekt door rood of infrarood licht is de lichtverstrooiing klein en de verstrooiing van kleine deeltjes is omgekeerd evenredig met de vierde macht van de golflengte.
2. Er kunnen meer verstrooide fotonen uit de afbeeldingsdwarsdoorsnede worden verzameld zonder dat er gaatjes nodig zijn.
3. Pinholes kunnen geen onderscheid maken tussen verstrooide fotonen die worden uitgezonden door onscherpe of focusgebieden, en multifotonen hebben een betere signaal-ruisverhouding bij diepe beeldvorming.
4. Het ultraviolette of zichtbare licht dat wordt gebruikt voor de excitatie van afzonderlijke fotonen wordt gemakkelijk geabsorbeerd en verzwakt door het monster voordat de straal het brandpuntsvlak bereikt, waardoor het moeilijk wordt om diepe lagen te exciteren.
5. In termen van biologische microscopieobservatie is de eerste overweging het niet beschadigen van de actieve toestand van het organisme zelf, het in stand houden van de circulatie van water, ionenconcentratie, zuurstof en voedingsstoffen. Op het gebied van lichtobservatie moeten zowel thermische als fotonenenergie binnen de bestralingsdosis en lichtenergie blijven die de cellen niet beschadigt.
6. Multifotonmicroscopie heeft veel voordelen. In termen van driedimensionale resolutie, diepte-invasie, verstrooiingsefficiëntie, achtergrondlicht, signaal-ruisverhouding, controle, etc. zijn er kenmerken die eerdere lasermicroscopen niet bezitten of niet kunnen overtreffen
Nadelen van een multiphoton-laserscanmicroscoop:
1. Alleen voor fluorescentiebeeldvorming.
2. Als het monster chromoforen bevat die excitatielicht kunnen absorberen, kan het monster worden blootgesteld aan thermische schade.
3. De resolutie is enigszins verminderd, hoewel deze kan worden verbeterd door gelijktijdig gebruik te maken van confocale kleine gaatjes; er is signaalverlies.
4. Vanwege de beperkingen van dure ultrasnelle lasers zijn de kosten van multiphoton-scanmicroscopen relatief hoog.
