Meting van de microbiële hoeveelheid - Microscopische directe telmethode!
De groei van bacteriepopulaties wordt gekenmerkt door een toename van het aantal cellen of een toename van celmateriaal. Er zijn verschillende methoden voor het meten van celaantallen, waaronder directe microscopische telling, plaattelling, turbometrie met spectrofotometer, meest waarschijnlijke aantal MPN en membraanfiltratie. De methoden voor het meten van cellulaire stoffen omvatten het meten van het droge gewicht van cellen, het meten van de inhoud van bepaalde componenten van cellen zoals stikstof, RNA en DNA, en het meten van metabolische producten. Samenvattend zijn er veel methoden voor het meten van microbiële groei, elk met zijn eigen voor- en nadelen, en de selectie moet gebaseerd zijn op specifieke vereisten in het werk. Dit experiment introduceert voornamelijk de veelgebruikte microscoop-directe telmethode bij productie- en wetenschappelijk onderzoekswerk.
Doelvereisten
1. Verduidelijk het principe van het gebruik van een bloedceltelbord voor het tellen.
2. Beheers de methode voor het gebruik van een bloedceltelbord voor het tellen van microben.
2, Basisprincipes
Microscopische directe telmethode is een eenvoudige, snelle en intuïtieve methode om een kleine hoeveelheid suspensie van een monster direct onder een microscoop te tellen door het op een speciaal glasplaatje met een bepaald oppervlak en volume te plaatsen (ook wel een bacterieteller genoemd). Op dit moment omvatten veelgebruikte bacteriële telapparaten in binnen- en buitenland onder meer bloedceltelplaten, Peteroff Hauser-bacterietelapparaten en Hawksley-bacterietelapparaten, die allemaal kunnen worden gebruikt voor het tellen van suspensies van gist, bacteriën, schimmelsporen, enz. met hetzelfde basisprincipe. De laatste twee soorten bacterietellers hebben een totaal volume van {{0}},02 mm3 nadat ze zijn afgedekt met een dekglas, en de afstand tussen het dekglas en het draagglaasje bedraagt slechts 0,02 mm. Daarom kan een olie-immersieobjectief worden gebruikt om kleinere cellen zoals bacteriën te observeren en te tellen. Naast het gebruik van deze bacterietellers bestaat er ook een schattingsmethode om de verhouding tussen uitstrijkoppervlak en veldoppervlak rechtstreeks onder een microscoop te observeren, die doorgaans wordt gebruikt voor bacteriologisch onderzoek van melk. De voordelen van direct tellen met een microscoop zijn intuïtief, snel en eenvoudig te bedienen. Maar het nadeel van deze methode is dat de meetresultaten meestal de som zijn van dode en levende cellen. Momenteel zijn er enkele methoden die dit nadeel kunnen ondervangen, zoals het combineren van een kamercultuur voor het kleuren van levende cellen (korte tijd) en het toevoegen van celdelingsremmers om het doel te bereiken om alleen levende cellen te tellen.
Gebruik een bord voor het tellen van bloedcellen als voorbeeld voor direct tellen onder een microscoop. De gebruikswijzen van de andere twee bacterietellers zijn terug te vinden in de handleidingen van diverse fabrikanten. Direct tellen onder een microscoop met behulp van een bloedceltelplaat is een veelgebruikte methode voor microbiële telling. Het telbord is een speciaal gemaakte glasplaat met vier groeven die drie platforms vormen; Het bredere platform in het midden is door een korte horizontale groef in twee helften verdeeld en aan elke kant van het platform bevindt zich een rooster. Elk raster is verdeeld in negen grote rasters, en het grote raster in het midden is de telkamer. De structuur van de plaat voor het tellen van bloedcellen wordt weergegeven in figuur l{{0}}. De schaal van de telkamer heeft doorgaans twee specificaties. Eén daarvan is dat een groot vierkant is verdeeld in 25 middelste vierkanten, en elk vierkant is verder verdeeld in 16 kleine vierkanten (Figuur 15-2); Een andere methode is om een groot vierkant in 16 middelste vierkanten te verdelen, en elk vierkant wordt vervolgens weer in 25 kleine vierkanten verdeeld. Ongeacht de grootte van het telbord zijn er echter 400 kleine vierkantjes in elk groot vierkant. Als de zijdelengte van elk vierkant 1 mm is, is de oppervlakte van elk groot vierkant lmm2. Na het afdekken met een dekglas is de hoogte tussen het dekglas en het glaasje 0,1 mm, waardoor het volume van de telkamer 0,1 mm3 (een duizendste milliliter) bedraagt. Figuur 15-1 Structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen (I) Figuur 15-2 Structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen (II) A Vooraanzicht; B. Verticaal doorsnedeaanzicht; Het vergrote raster heeft in het midden een groot vierkant als telkamer 1. Bord voor het tellen van bloedcellen; 2. Afdekglas; Bij het tellen in de telkamer wordt het totale kiemgetal gewoonlijk berekend voor vijf vierkanten. Vervolgens wordt de gemiddelde waarde van elk vierkant verkregen, vermenigvuldigd met 25 of 16 om het totale kiemgetal in een groot vierkant te verkrijgen, dat vervolgens wordt omgezet in de totaal aantal bacteriën in de 1 ml bacterieoplossing. Ervan uitgaande dat het totale aantal bacteriën in vijf vierkante roosters A is en de verdunningsfactor van de bacteriële oplossing B is. Als er 25 telplaten in het vierkante rooster staan, is het totale aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Als er 16 telplaten in het vierkante rooster staan, is het totale aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
