Microbiologische microscoop direct tellen
Experimenteel principe
Direct tellen onder een microscoop met behulp van een hemocytometer is een veelgebruikte microbiële telmethode. Het voordeel van deze methode is dat het intuïtief en snel is. Plaats de goed verdunde bacteriesuspensie (of sporensuspensie) in de telkamer tussen het glaasje en het dekglas van de hemocytometer en tel onder de microscoop. Aangezien het volume van de telkamer vast is (0.1mm2), kan het worden omgezet in het totale aantal micro-organismen per volume-eenheid volgens het aantal micro-organismen dat onder de microscoop wordt waargenomen. Omdat deze methode de som van levende en dode bacteriën telt, wordt het ook wel de totaal aantal bacteriën genoemd.
Een hemocytometer is meestal een speciaal glasplaatje waarop vier groeven drie platforms vormen. Het platform in het midden is door een korte horizontale groef in twee helften verdeeld. Op het platform is aan elke kant een rooster gegraveerd. Elk raster is verdeeld in negen grote vierkanten. Het grote vierkant in het midden is de telkamer. In de telkamer worden micro-organismen geteld.
De schaal van de telkamer heeft over het algemeen twee specificaties: de ene is dat een groot vierkant is verdeeld in 16 middelste vierkanten en dat elk middelste vierkant is verdeeld in 25 kleine vierkanten (Afbeelding Ⅷ-2); de andere is een groot vierkant. Het vierkant is verdeeld in 25 middelste vierkanten en elk middelste vierkant is verdeeld in 16 kleine vierkanten (Afbeelding Ⅷ-1, C). Maar wat voor telbord het ook is, het aantal kleine vierkanten in elk groot vierkant is hetzelfde, dat wil zeggen 16×25=400 kleine vierkanten.
De zijlengte van elk groot vierkant is 1 mm en de oppervlakte van elk groot vierkant is 1 mm2. Nadat het dekglas is afgedekt, is de hoogte tussen het schuifglas en het dekglas 0.1 mm, dus het volume van de telkamer is 0.1mm3.
Tel bij het tellen meestal het totale aantal bacteriën in de vijf middelste vierkanten, verkrijg vervolgens de gemiddelde waarde van elk middelste vierkant en vermenigvuldig dit met 16 of 25 om het totale aantal bacteriën in een groot vierkant te krijgen, en vervolgens omgerekend naar de totaal aantal bacteriën in 1 ml bacterieoplossing.
Labuitrusting
Hemocytometer, microscoop, dekglaasje, steriel capillair;
Experimentele materialen
Suspensie van Saccharomyces cerevisiae
Experimentele procedure (directe telmethode microbiële microscoop)
1. verdunning
Verdun de Saccharomyces cerevisiae-suspensie goed. Als de bacteriële oplossing niet dik is, hoeft deze niet te worden verdund.
2. Microscopische telkamer
Voordat u monsters toevoegt, voert u een microscopische inspectie uit van de telkamer van de telplaat. Als er vuil is, moet het vóór het tellen worden schoongemaakt.
3. monster toevoegen
Bedek de schone en droge hemocytometerplaat met een dekglas en gebruik vervolgens een steriele druppelaar met smalle mond om een kleine druppel van de verdunde Saccharomyces cerevisiae-oplossing vanaf de rand van het dekglas te laten vallen (niet te veel), zodat de bacterieoplossing ligt dicht bij de kloof langs de kloof. Capillaire osmose komt vanzelf de telkamer binnen en de algemene telkamer kan worden gevuld met bacteriële vloeistof. Pas op dat er geen luchtbellen ontstaan.
4. microscooptelling
Plaats na 5 minuten rust de hemocytometer op het podium van de microscoop, gebruik eerst een lens met laag vermogen om de locatie van de telkamer te vinden en schakel vervolgens over op een lens met hoog vermogen om te tellen. Als blijkt dat de bacterieoplossing te dik of te dun is voordat u gaat tellen, moet u de verdunning opnieuw aanpassen voordat u gaat tellen. De algemene monsterverdunning vereist ongeveer
5-10 cellen zijn geschikt. Elke telkamer selecteert de bacteriën in 5 middelste roosters (optioneel 4 hoeken en centrale roosters) om te tellen. De bacteriën op de rasterlijn worden over het algemeen alleen op de bovenste en rechter lijn geteld. In het geval van gistontluiking, wanneer de grootte van het knoplichaam de helft van de moedercel bereikt, tel dan twee bacteriën. Tel een monster om het bacteriegehalte van het monster te berekenen uit de waarden die in de twee telkamers zijn geteld.
5. Reiniging van de hemocytometer
Spoel na gebruik het bloedplaatje op de kraan af met waterstralen, was het niet met harde voorwerpen en droog het zelf of met een föhn na het wassen. Microscopisch onderzoek, kijk of er achtergebleven bacteriën of andere sedimenten in elke cel aanwezig zijn. Als het niet schoon is, moet het herhaaldelijk worden gewassen totdat het schoon is.
