Principe en constructie van fluorescentiemicroscoop
De fluorescentiemicroscoop maakt gebruik van een puntlichtbron met een hoog lichtrendement, die een bepaalde golflengte van licht (zoals ultraviolet licht van 3650 inch of violetblauw licht van 4200 inch) als excitatielicht uitzendt via een kleurfiltersysteem, en de fluorescerende stoffen in het monster exciteert om zenden verschillende kleuren fluorescentie uit. Daarna wordt het waargenomen door vergroting van het objectief en het oculair. Op deze manier is het, zelfs met zwakke fluorescentie, gemakkelijk herkenbaar en zeer gevoelig onder sterk contrasterende achtergronden, voornamelijk gebruikt voor het bestuderen van de celstructuur en -functie, evenals de chemische samenstelling. De basisstructuur van een fluorescentiemicroscoop bestaat uit een gewone optische microscoop en enkele accessoires (zoals een fluorescerende lichtbron, excitatiefilter, bichromatische straalscheider en blokkeerfilter, enz.). Fluorescerende lichtbronnen - gebruiken meestal kwiklampen met ultrahoge druk (50-200W), die licht van verschillende golflengten kunnen uitstralen. Elke fluorescerende stof heeft echter een excitatielichtgolflengte die de sterkste fluorescentie produceert, dus excitatiefilters (meestal ultraviolet, paars, blauw en groen excitatiefilters) moeten worden toegevoegd om slechts een bepaalde golflengte van excitatielicht door te laten en te verlichten. het monster, terwijl al het andere licht wordt geabsorbeerd. Na bestraling met geëxciteerd licht zendt elke stof in zeer korte tijd zichtbare fluorescentie uit met een langere golflengte dan de bestraling. Fluorescentie heeft specificiteit en is over het algemeen zwakker dan excitatielicht. Om specifieke fluorescentie waar te nemen, moet achter de objectieflens een blokkerend (of onderdrukkend) filter worden toegevoegd. Het heeft twee functies: ten eerste absorbeert en blokkeert het excitatielicht dat het oculair binnendringt om verstoring van de fluorescentie en beschadiging van de ogen te voorkomen; ten tweede selecteert en laat het specifieke fluorescentie door, waardoor een specifieke fluorescentiekleur wordt weergegeven. Beide typen filters moeten worden geselecteerd om samen te gebruiken.
Er zijn twee soorten fluorescentiemicroscopen op basis van hun optische pad:
1. Transmissiefluorescentiemicroscoop: De excitatielichtbron wordt via een condensor door het monstermateriaal gestuurd om de fluorescentie op te wekken. Veelgebruikte donkerveldlichtcollectoren, of gewone lichtcollectoren, kunnen worden gebruikt om de reflector aan te passen om excitatielicht en zijlicht op het monster om te zetten. Dit is een relatief ouderwetse fluorescentiemicroscoop. Het voordeel is dat de fluorescentie sterk is bij een lage vergroting, terwijl het nadeel is dat de fluorescentie zwakker wordt naarmate de vergroting toeneemt. Daarom is het beter voor het observeren van grotere monstermaterialen.
2. Falling beam fluorescentiemicroscoop Dit is een nieuw type fluorescentiemicroscoop dat in de moderne tijd is ontwikkeld. In tegenstelling tot de vorige valt het excitatielicht van de objectieflens naar het oppervlak van het monster, waarbij dezelfde objectieflens wordt gebruikt als de verlichtingscondensator en de objectieflens voor het verzamelen van fluorescentie. Er moet een dubbele kleurenbundelscheider worden toegevoegd aan het optische pad, dat zich in een hoek van 45 graden bevindt met het lichte uranium. Het excitatielicht wordt gereflecteerd in de objectieflens en geconcentreerd op het monster. De door het monster gegenereerde fluorescentie, evenals het excitatielicht dat wordt gereflecteerd door het oppervlak van de objectieflens en het dekglas, komen gelijktijdig de objectieflens binnen en keren terug naar de dichroïsche bundelscheider, waardoor de excitatie en fluorescentie worden gescheiden. De resterende excitatie wordt vervolgens geabsorbeerd door het blokkeerfilter. Als er verschillende combinaties van excitatiefilters/dubbele kleurenbundelscheiders/blokkeerfilters worden gebruikt, kunnen deze voldoen aan de behoeften van verschillende fluorescerende reactieproducten. Het voordeel van deze fluorescentiemicroscoop is dat de gezichtsveldverlichting uniform is, de beeldvorming helder is en hoe groter de vergroting, hoe sterker de fluorescentie.
