Vereisten voor de voorbereiding van routinemonsters voor microscopie
Confocale microscoop is een baanbrekend hightech nieuw product dat in de jaren tachtig is ontwikkeld en het is tegenwoordig een van de belangrijke analytische instrumenten in de moleculaire biologie en biowetenschappen. Confocale microscopie is gebaseerd op beeldvorming met een fluorescentiemicroscoop waaraan een laserscanapparaat is toegevoegd, waarbij een computer wordt gebruikt voor beeldverwerking om fluorescerende beelden van de microstructuur in cellen of weefsels te verkrijgen en om veranderingen in de morfologie van veel fysiologische signaalmachines op subcellulair niveau waar te nemen. Word een krachtig onderzoeksinstrument op het gebied van morfologie, moleculaire celbiologie, neurowetenschappen, farmacologie, genetica en andere wetenschappelijke gebieden.
Monstervoorbereiding voor confocale microscopie is een cruciale stap voorafgaand aan detectie. Monsters moeten worden gelabeld met fluorescerende sondes (enkel, dubbel, drievoudig).
de
Specimens kunnen gefixeerde of levende weefsels zijn, of gefixeerde of levende hechtende culturen. Cellen moeten worden gekweekt op confocale speciale kleine kweekschalen of dekglaasjes. Suspendeer cellen, schud of laat plakjes vallen en dek af met afdekfolie. De Zda-dikte van het monster is ongeveer 1~2 mm, de dikte van het gebruikte dekglas moet kleiner zijn dan 0.17 mm en de dikte van het schuifglas moet tussen 0.8~1.2 zijn mm, en het oppervlak is glad, de dikte is uniform en er is geen duidelijke interferentiefluorescentie. Montagemedium wordt vaak gebruikt voor vaste monsters en glycerol bereid in PBS met een pH van 8.5-9 wordt vaak gebruikt voor montage.
Vereisten voor routinematige monstervoorbereiding:
1. Selectie van kleurstoffen
Aangezien de confocale microscoop een laser met één golflengte als lichtbron gebruikt, moet de keuze van fluorescerende kleurstoffen worden gebaseerd op de golflengte van de laser die is uitgerust met de confocale microscoop. Als er meerdere fluorescerende kleurstoffen in hetzelfde monster zitten, moet ook zoveel mogelijk rekening worden gehouden met hun emissiegolflengte. Overlap niet om kruiskleurproblemen te voorkomen.
2. Selectie van monsterdrager
Over het algemeen is de krachtige objectieflens van een confocale microscoop een olielens, is de numerieke apertuur klein en mag de werkafstand tussen de lens en het monster niet meer zijn dan 0.17 mm. Objectglaasjes en dekglaasjes zijn prima. Als het zwevende cellen of zwevende deeltjes zijn, kan een petrischaal speciaal voor een confocale microscoop worden gebruikt om het monster ter observatie te vervoeren.
3. Selectie van montagemedium
Als het monster maar één keer hoeft te worden geobserveerd en de fluorescentie niet gemakkelijk wordt gedoofd, kunt u een bepaalde concentratie glycerolmengsel kiezen om het objectglaasje te verzegelen. Als het monster gedurende een bepaalde tijd moet worden geplaatst en meerdere keren moet worden genomen, moet een anti-fluorescentie-uitdovend bevestigingsmedium worden gekozen om het verlies van fluorescentiesignalen te verminderen.
