Vereisten voor de productie van fluorescentiemicroscoopmonsters
(1) Glazen glijbaan
De dikte van de glijbaan moet tussen 0,8 en 1,2 mm liggen. Als het objectglaasje te dik is, absorbeert het enerzijds meer licht en anderzijds kan het er niet voor zorgen dat er excitatielicht op het preparaat terechtkomt. Het objectglaasje moet glad zijn, uniform van dikte en vrij van duidelijke spontane fluorescentie. Soms zijn kwartsglasplaatjes nodig.
(2) Bedek het glasplaatje
De dikte van het dekglas is ongeveer 0,17 mm, wat glad en schoon is. Om de excitatie te vergroten, kan ook interferentie-afdekglas worden gebruikt. Dit is een speciaal ontworpen dekglas met meerdere lagen stoffen (zoals magnesiumfluoride) die verschillende interferentie-effecten hebben op verschillende golflengten van licht. Het kan ervoor zorgen dat de fluorescentie soepel verloopt, terwijl reflectie-excitatie het monster kan prikkelen.
(3) Voorbeeld
Weefselcoupes of andere monsters mogen niet te dik zijn, omdat het excitatielicht meestal in het onderste deel van het monster wordt verbruikt, terwijl het bovenste deel dat rechtstreeks door de objectieflens wordt waargenomen, niet volledig wordt geëxciteerd. Bovendien kunnen celoverlap of het maskeren van onzuiverheden het beoordelingsvermogen beïnvloeden.
(4) Afdichtingsmiddel
Glycerine wordt gewoonlijk gebruikt als fixeermiddel en moet vrij zijn van spontane fluorescentie, kleurloos en transparant. De helderheid van de fluorescentie is helderder bij pH 8,5 ~ 9,5 en het is niet gemakkelijk om snel te vervagen. Daarom wordt gewoonlijk een gelijk mengsel van glycerol en 0.5mol/l carbonaatbuffer bij pH 9.0-9.5 gebruikt als afdichtingsmiddel.
(5) Spiegelolie
Bij het observeren van preparaten met een donkerveldfluorescentiemicroscoop en een oliemicroscoop is het noodzakelijk lensolie te gebruiken. Het beste kunt u een speciaal gemaakte niet-fluorescerende lensolie gebruiken, die ook vervangen kan worden door glycerol, zoals hierboven vermeld. Vloeibare paraffine kan ook worden gebruikt, maar de brekingsindex is laag en heeft een kleine invloed op de beeldkwaliteit.
Voorzorgsmaatregelen voor het gebruik van een fluorescentiemicroscoop
(1) Volg strikt de fabriekshandleidingvereisten van de fluorescentiemicroscoop en verander het programma niet willekeurig.
(2) Inspectie moet worden uitgevoerd in een donkere kamer. Nadat u de donkere kamer bent binnengegaan, sluit u de voeding aan en steekt u de ultrahogedrukkwiklamp gedurende 5 tot 15 minuten aan. Nadat de lichtbron sterk licht uitzendt en zich stabiliseert, passen de ogen zich volledig aan de donkere kamer aan voordat ze het exemplaar gaan observeren.
(3) Om UV-schade aan de ogen te voorkomen, moet bij het afstellen van de lichtbron een veiligheidsbril worden gedragen.
(4) De inspectietijd moet elke keer 1-2 uur bedragen. Als deze langer dan 90 minuten duurt, neemt de lichtsterkte van de ultrahogedrukkwiklamp geleidelijk af en verzwakt de fluorescentie; Na blootstelling aan ultraviolette straling gedurende 3-5 minuten nam de fluorescentie van het monster ook aanzienlijk af; Het mag dus maximaal 2-3 uur duren.
(5) De levensduur van de lichtbron van de fluorescentiemicroscoop is beperkt en het monster moet centraal worden geïnspecteerd om tijd te besparen en de lichtbron te beschermen. Als het warm weer is, moet een elektrische ventilator worden toegevoegd om de warmte af te voeren en af te koelen. Bij het vervangen van een nieuwe lamp moet de gebruikstijd vanaf het begin worden geregistreerd. Wanneer de lamp wordt uitgeschakeld en opnieuw wil worden gebruikt, moet hij wachten tot de lamp volledig is afgekoeld voordat hij wordt ontstoken. Vermijd het meerdere malen ontsteken van de lichtbron.
(6) Observeer het monster onmiddellijk na het kleuren, aangezien de fluorescentie in de loop van de tijd geleidelijk afneemt. Als het monster in een polyethyleen plastic zak bij 4 graden wordt bewaard, kan dit de fluorescentieverzwakkingstijd vertragen en de verdamping van het bevestigingsmiddel voorkomen.
(7) De beoordelingsnorm voor fluorescentiehelderheid wordt over het algemeen verdeeld in vier niveaus, namelijk "één" - geen of zichtbare zwakke fluorescentie. plus - Alleen duidelijk zichtbare fluorescentie is waarneembaar. plus plus - Zichtbaar met heldere fluorescentie. 'plus plus plus' - Zichtbare en oogverblindende fluorescentie.
