Verschillende opmerkingen en tips voor het gebruik van fasecontrastmicroscopie
Gebruik van fasecontrastmicroscopie
1) Installeer het fasecontrastapparaat: verwijder de condensorlens van de gewone microscoop en installeer de condensorlens met een ringvormig diafragma op een bijpassende microscoop; verwijder de gewone objectieflens van de microscoop en vervang deze door een objectieflens met een faseplaat; vervang het oculair door focusserende oculairs voor fasecontrastmicroscopen; bij de lichtingang van de lichtbron worden speciale groenfilters (soms niet nodig) geplaatst.
2) Uitlijning en focus van het licht: stel het focusoculair en de dikte-instelschroef af totdat er duidelijk een witte cirkel en een zwarte cirkel in het gezichtsveld te zien zijn. De zwarte cirkel is vast en de witte cirkel kan worden verplaatst door de schroef op het condensorapparaat aan te passen, zodat de zwarte cirkel en de witte cirkel volledig samenvallen. Verwijder het scherpsteloculair en vervang het door het originele oculair van de microscoop ter controle.
Analyse van problemen bij het gebruik van de fasecontrastmicroscoop
1. De invloed van de monsterdikte Bij het uitvoeren van fasecontrastwaarnemingen moet de dikte van het monster 5 μm of dunner zijn. Bij gebruik van een dikker monster is de bovenste laag van het monster zeer helder, maar de diepe laag zal wazig zijn en faseverschuivingsinterferentie veroorzaken. en lichtverstrooiing.
2. De invloed van dekglas en schuifglas Het monster moet worden afgedekt met een dekglas, anders overlappen de heldere ring van het ringvormige diafragma en de donkere ring van de faseplaat elkaar moeilijk. Fasecontrastwaarneming stelt ook hoge eisen aan de glaskwaliteit van schuifglas en dekglas. Wanneer er krassen, ongelijke dikte of oneffenheden zijn, zal heldere ringvervorming en fase-interferentie optreden. Bovendien, wanneer de dia te dik of te dun is, zal de heldere ring van het ringvormige diafragma groter of kleiner worden.
3. Halo- en vervagingseffect In het beeldvormingsproces van een fasecontrastmicroscoop, wanneer een bepaalde structuur donker wordt als gevolg van fasevertraging, is dit niet het verlies van licht, maar het resultaat van herverdeling van licht op het beeldvlak. Dus licht dat schijnbaar verloren gaat in donkere gebieden, zal verschijnen als een heldere halo rond donkere objecten. Dit is een nadeel van fasecontrastmicroscopie, dat de waarneming van fijne structuren verhindert, en het halo-fenomeen is ernstiger wanneer het ringvormige diafragma erg smal is. Een ander fenomeen in fasecontrastmicroscopie is het schaduweffect, dat verwijst naar het verlies van contrast aan de randen van een groter gebied met dezelfde fasevertraging wanneer waargenomen door fasecontrast.
4. Fase-inversie Bij n'n is het lichte en donkere contrast van het beeld precies tegenovergesteld, wat fase-inversie wordt genoemd. Het is onherkenbaar wanneer het faseverschil δ=0 is, en het contrast wordt groter met de toename van δ, en de fase-inversie zal verschijnen wanneer δ blijft toenemen tot een bepaalde waarde. Bij gebruik van een objectieflens met een hoge absorptiewaarde van 90 (hoog contrast), is deze transformatiewaarde ongeveer 0.55λ, en bij gebruik van een objectieflens met een standaardabsorptiewaarde van 70% is deze ongeveer 0,33λ . Objectieven met hogere absorptiewaarden moeten worden gebruikt om kleinere optische padverschillen op te lossen.
