Kleuringstechnieken en microscopische observatie van micro-organismen
Eenvoudige kleuring van bacteriën
1 Doelstellingen
1.1 De basistechnieken van microbiële uitstrijk en kleuring leren.
1.2 De eenvoudige kleuringsmethode van bacteriën beheersen.
1.3 De morfologische kenmerken van bacteriën leren kennen en het leren van het gebruik van oliespiegel- en aseptische operatietechnieken consolideren.
2 Principe Het uitstrijken en kleuren van bacteriën is een basistechniek in microbiologische experimenten. De cellen van bacteriën zijn klein en transparant, ze zijn niet gemakkelijk te herkennen onder de gewone lichtmicroscoop en ze moeten worden gekleurd. Het gebruik van een enkele kleurstof om de bacteriën te kleuren, zodat het gekleurde organisme en de achtergrond een duidelijk kleurverschil vormen, zodat hun morfologie en structuur duidelijker kunnen worden waargenomen. Deze methode is eenvoudig uit te voeren en is geschikt voor het observeren van de algemene vorm van het organisme en de rangschikking van de bacteriën. Alkalische kleurstoffen worden vaak gebruikt voor eenvoudige kleuring, omdat in neutrale, alkalische of zwak zure oplossingen bacteriële cellen meestal negatief geladen zijn, en wanneer alkalische kleurstoffen worden geïoniseerd, is het kleurgedeelte van hun moleculen positief geladen, dus het kleurgedeelte van alkalische kleurstoffen kan zich gemakkelijk aan de bacteriën binden om de bacteriën gekleurd te maken. De gekleurde bacteriecellen contrasteren scherp met de achtergrond en zijn gemakkelijker te herkennen onder de microscoop. Veelgebruikte kleurstoffen voor eenvoudige kleuring zijn onder meer merocyanineblauw, kristalviolet en basische verbinding rood. Wanneer de bacteriële afbraak van suiker zuur produceert, zodat de pH van het medium afneemt, neemt de positieve lading van de bacteriën toe en kan deze vervolgens worden gebruikt bij het kleuren van rood, zuurrood of Congorood en andere zure kleurstoffen. De bacteriën moeten vóór het kleuren worden gefixeerd. Het doel ervan is tweeledig: het ene is om de bacteriën te doden en ervoor te zorgen dat de bacteriën zich aan het objectglaasje hechten; de tweede is om de affiniteit voor de kleurstof te vergroten. Twee methoden worden vaak gebruikt: verwarming en chemische fixatie. Probeer bij het repareren de oorspronkelijke morfologie van de cellen te behouden.
3 Materialen
3.1 Stam Bacillus subtilis 12-18h voedingsagar schuine cultuur, Staphylococcus aureus ongeveer 24 uur voedingsagar schuine cultuur, Escherichia coli 24 uur voedingsagar schuine cultuur, bakkersgistagar schuine cultuur.
3.2 Vlekken Lue's alkalische methyleenblauwe vlek (of ammoniumoxalaat kristalviolet vlek), rode vlek met carbolzuurverbinding.
3.3 Instrumenten of andere parafernalia Microscoop, alcohollamp, objectglaasje, inentingsring, objectglaasjeshouder, dubbellaagse fles (gevuld met cederolie en xyleen), microscooppapier, fysiologische zoutoplossing of gedestilleerd water, enz.
4 Werkwijze Uitstrijkje → drogen → fixeren → kleuren → wassen → drogen → microscopisch onderzoek.
5 stappen
5.1 uitstrijken Neem twee schone en olievrije objectglaasjes, elk met een klein druppeltje zoutoplossing (of gedestilleerd water) in het midden van het objectglaasje onder aseptische omstandigheden, met een entring om aseptisch te opereren vanuit respectievelijk de Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus en Escherichia coli schuin om een beetje mos in de waterdruppel te plukken, te mengen en te bedekken met een film. Als de bacteriesuspensie (of vloeibare cultuur) uitsmeert, kunt u de ring inoculeren door 2 tot 3 ringen direct op het objectglaasje te enten. Houd er rekening mee dat de zoutoplossing (gedestilleerd water) en neem de bacteriën niet te veel en gelijkmatig verdeeld, niet te dik.
5.2 Drogen Natuurlijk drogen bij kamertemperatuur. Het kan ook worden gedroogd door het iets boven een alcohollamp te verwarmen met de gecoate kant naar boven. Kom echter niet te dicht bij de vlam, omdat een te hoge temperatuur de morfologie van de bacteriën zal vernietigen.
5.3 Fixatie Bij gebruik van hittedroging worden fixatie en droging op dezelfde manier als drogen in één stap gecombineerd. Uitsmeren, drogen en hittefixeren.
5.4 Kleuring Plaats het objectglaasje plat op het objectglaasjesrek en voeg 1 tot 2 druppels kleuroplossing toe aan het uitstrijkje (de kleuroplossing bedekt net de uitstrijkfilm, is geschikt). Kleur het uitstrijkje gedurende 1~2 minuten met Lü's Basic Mellanox Blue en gedurende ongeveer 1 minuut met Carbonate Red (of ammoniumoxalaatkristalviolet).
5.5 Spoelen Giet de kleuroplossing af en spoel voorzichtig met kraanwater vanaf het ene uiteinde van de glijbaan totdat het water dat uit het uitstrijkje naar beneden loopt kleurloos is. Laat tijdens het spoelen het water niet rechtstreeks stromen om het gecoate oppervlak te wassen. De waterstroom mag niet te snel of te groot zijn om te voorkomen dat de smeerfilm losraakt.
5.6 Drogen Schud de waterdruppels op het objectglaasje af om op natuurlijke wijze te drogen, föhnen of absorberend papier kan worden gebruikt om droog te absorberen (pas op dat u het bacteriële lichaam niet afveegt). 5.7 Microscopisch onderzoek Het uitstrijkje wordt gedroogd en microscopisch onderzocht. Het uitstrijkje moet volledig droog zijn voordat het met een oliemicroscoop kan worden waargenomen.
6 Resultaten Teken de morfologie van E. coli en Micrococcus garciniae na enkele kleuring.
Gram-vlek
1. Doel
1.1 Het principe van Gramkleuring begrijpen en het belang ervan bij de classificatie en identificatie van bacteriën.
1.2 De Gram-kleuringstechniek leren en beheersen en het leren van het gebruik van de olielens van de lichtmicroscoop consolideren.
