Structuur en hoofdcomponenten van een fluorescentiemicroscoop
Fluorescentiemicroscopie is een essentieel instrument in immunofluorescente cytochemie. Het is samengesteld uit hoofdcomponenten zoals lichtbron, filterplaatsysteem en optisch systeem. Het is om een bepaalde golflengte van licht te gebruiken om het monster op te wekken om fluorescentie uit te zenden, en om het fluorescentiebeeld van het monster waar te nemen door de objectieflens en het oculairsysteem te versterken.
Structuur en hoofdcomponenten van een fluorescentiemicroscoop
(1) Lichtbron
Tegenwoordig worden vaak 200W ultrahogedrukkwiklampen als lichtbronnen gebruikt. Ze zijn gemaakt van kwartsglas, met een bolvorm in het midden, en er zit een bepaalde hoeveelheid kwik in. Tijdens het werk zorgt de ontlading tussen de twee elektroden ervoor dat kwik verdampt en stijgt de luchtdruk in de bal snel. Wanneer het kwik volledig is verdampt, kan het 50-70 standaard atmosferische druk bereiken en dit proces duurt over het algemeen ongeveer 5-15 minuten. De luminescentie van de ultrahogedrukkwiklamp is het resultaat van de emissie van lichtkwanta tijdens de continue dissociatie en reductie van kwikmoleculen door de ontlading tussen de elektroden. Het straalt sterk ultraviolet en blauwviolet licht uit, wat voldoende is om verschillende fluorescerende stoffen op te wekken, dus wordt het veel gebruikt in fluorescentiemicroscopie.
Ultrahogedrukkwiklampen geven ook veel warmte af. Daarom moet het lamphuis een goede warmteafvoer hebben en mag de temperatuur van de werkomgeving niet te hoog zijn.
De nieuwe ultrahogedrukkwiklamp kan aan het begin van het gebruik zonder hoogspanning worden ontstoken. Na een periode van gebruik moet hij op hoogspanning (ongeveer 15000V) worden gestart. Na het starten is de werkspanning voor onderhoud over het algemeen 50-60V en de werkstroom ongeveer 4A. De gemiddelde levensduur van een ultrahogedrukkwiklamp van 200 W is ongeveer 200 uur als deze elke keer 2 uur wordt gebruikt. Hoe korter de werktijd, hoe korter de levensduur. Als het maar 20 minuten wordt gebruikt, wordt de levensduur met 50 procent verkort. Minimaliseer daarom het aantal starts bij gebruik. Tijdens het gebruik van de lamp wordt de lichtopbrengst geleidelijk verminderd. Nadat het lampje is uitgegaan, wacht u tot het is afgekoeld voordat u het opnieuw start. Schakel de lamp niet onmiddellijk na het ontsteken uit, om de elektrode niet te beschadigen door onvolledige kwikverdamping. Over het algemeen moet het 15 minuten wachten. Vanwege de hoge druk van de ultrahogedrukkwiklamp en de sterke ultraviolette stralen moet de lamp in de lampkamer worden geplaatst voordat deze kan worden ontstoken, om de ogen niet te beschadigen en werking te veroorzaken in geval van een explosie .
Het circuit van de ultra-hogedruk kwiklamp (100W of 200W) lichtbron en diverse onderdelen waaronder transformator, ballast en start. Er is een systeem om het lichtgevende centrum van de lamp in de lampkamer aan te passen. Achter de gloeilamp is een met aluminium beklede concave reflector geïnstalleerd en aan de voorkant is een lichtverzamelende lens geïnstalleerd.
De huishoudelijke ultrahogedrukkwiklamp GCQ-200 presteert goed en kan geïmporteerde lampen zoals HBO-200 vervangen. De gemiddelde levensduur is meer dan 200 uur en de prijs is relatief laag.
Een eenvoudig en draagbaar broomwolfraam fluorescerend lichtbronapparaat met hoge kleurtemperatuur, ontwikkeld in mijn land, is klein van formaat, licht van gewicht, laag stroomverbruik, AC en DC voor tweeërlei gebruik (met DC-voeding), gemakkelijk mee te nemen, gemakkelijk te gebruiken en heeft populair gemaakt en toegepast.
(2) Kleurenfiltersysteem
Het kleurenfiltersysteem is een belangrijk onderdeel van de fluorescentiemicroscoop, die bestaat uit een excitatiefilterplaat en een persfilterplaat. Het filterplaatmodel en de naam van elke fabrikant zijn vaak niet uniform. De filterplaten zijn over het algemeen vernoemd naar de basiskleur, de letters vooraan staan voor de kleur, de letters achteraan staan voor het glas en de cijfers staan voor de kenmerken van het model. olympus microscoop
(3) Objectieflens
Er kunnen verschillende objectieflenzen worden gebruikt, maar achromatische objectieflenzen worden gebruikt omdat hun autofluorescentie minimaal is en hun lichttransmissie-eigenschappen (golflengtebereik) geschikt zijn voor fluorescentie. Aangezien de fluorescentiehelderheid van het beeld in het gezichtsveld van de microscoop evenredig is met het kwadraat van de diafragmaverhouding van de objectieflens en omgekeerd evenredig met de vergroting ervan, is, om de helderheid van het fluorescentiebeeld te verbeteren, een objectieflens met een grote diafragmaverhouding moet worden gebruikt. Vooral bij sterke vergroting is het effect heel duidelijk. Daarom moet voor monsters met onvoldoende fluorescentie een objectieflens met een grote diafragmaverhouding worden gebruikt met een zo klein mogelijk oculair (4×, 5×, 6,3×, enz.).
(4) Spiegel
De reflecterende laag van de reflector is over het algemeen gealuminiseerd, omdat aluminium minder absorbeert in het blauwviolette gebied van ultraviolet licht en zichtbaar licht, en de reflectie meer dan 90 procent is, terwijl de reflectie van zilver slechts 70 procent is. Over het algemeen wordt een vlakke reflector gebruikt.
(5) Condensor
Condensors ontworpen voor fluorescentiemicroscopie zijn gemaakt van kwartsglas of ander UV-transparant glas. Er zijn twee soorten helderveldcondensors en donkerveldcondensors. Er zijn ook fasecontrastfluorescentieconcentratoren.
(6) Epi-light-apparaat
Het nieuwe type epi-lichtapparaat is dat nadat het licht van de lichtbron het interferentiespectroscopische filter raakt, het korte golflengtegedeelte (ultraviolet en paarsblauw) wordt gereflecteerd vanwege de eigenschappen van de coating op het filter. Wanneer het filter naar de lichtbron is gericht, is de hoek 45. Wanneer het gekanteld is, schiet het verticaal naar de objectieflens en schiet het naar het preparaat door de objectieflens, zodat het preparaat wordt geëxciteerd. Op dit moment fungeert de objectieflens direct als een lichtcollector. Tegelijkertijd is het lange deel van het filter (groen, geel, rood, etc.) transparant voor het filter, zodat het niet reflecteert in de richting van de objectieflens, en het filter werkt als een excitatiefilterplaat, omdat de fluorescentie van het monster zich in het lange golflengtegebied van zichtbaar licht bevindt, door het filter kan gaan en het oculair kan bereiken voor observatie, neemt de helderheid van het fluorescerende beeld toe met de toename van de vergroting en is sterker dan het doorgelaten licht bron bij sterke vergroting. Naast de functie van een transmissielichtbron, is het geschikter voor directe observatie van ondoorzichtige en doorzichtige specimens, zoals dikke plakken, filtermembranen, kolonies, en weefselkweekspecimens. De nieuwe fluorescentiemicroscopen die de afgelopen jaren zijn ontwikkeld, maken meestal gebruik van epi-lichtapparaten, die epifluorescentiemicroscopen worden genoemd.
