Het verschil tussen fluorescentie- en laserconfocale microscopie
fluorescentie microscoop
1. Fluorescentiemicroscoop is een apparaat dat ultraviolet licht als lichtbron gebruikt om het te testen object te verlichten, waardoor het fluorescentie uitstraalt en vervolgens de vorm en positie van het object onder de microscoop observeert. Fluorescentiemicroscopie wordt gebruikt om de absorptie, het transport, de distributie en de lokalisatie van stoffen in cellen te bestuderen. Sommige stoffen in cellen, zoals chlorofyl, kunnen fluorescentie uitstralen na blootstelling aan ultraviolette straling; Sommige stoffen zelf emitteren mogelijk geen fluorescentie, maar als ze worden gekleurd met fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende antilichamen, kunnen ze ook fluorescentie uitstralen onder ultraviolette straling. Fluorescentiemicroscopie is een van de hulpmiddelen voor kwalitatief en kwantitatief onderzoek naar deze stoffen.
2. Principe van fluorescentiemicroscoop:
(A) Lichtbron: De lichtbron zendt licht uit met verschillende golflengten (van ultraviolet tot infrarood).
(B) Lichtbron van excitatiefilter: licht van een specifieke golflengte uitzenden dat fluorescentie in het monster kan produceren, terwijl licht wordt geblokkeerd dat nutteloos is voor excitatiefluorescentie.
(C) Fluorescerende exemplaren: doorgaans gekleurd met fluorescerende pigmenten.
(D) Blokkeerfilter: zendt selectief fluorescentie uit door excitatielicht te blokkeren dat niet door het monster is geabsorbeerd, en sommige golflengten worden ook selectief doorgelaten in fluorescentie. Een microscoop die ultraviolet licht als lichtbron gebruikt om fluorescentie van het bestraalde object uit te zenden. De elektronenmicroscoop werd voor het eerst geassembleerd door Knorr en Harroska in Berlijn, Duitsland in 1931. Dit type microscoop maakt gebruik van een snelle elektronenbundel in plaats van een lichtbundel. Vanwege de veel kortere golflengte van de elektronenstroom in vergelijking met lichtgolven, kan de vergroting van de elektronenmicroscoop 800000 keer bereiken, met een minimale resolutielimiet van 0,2 nanometer. Met de scanning-elektronenmicroscoop, die in 1963 in gebruik werd genomen, kunnen mensen de kleine structuren op het oppervlak van objecten zien.
3. Toepassingsgebied: wordt gebruikt om afbeeldingen van kleine objecten te vergroten. Over het algemeen gebruikt voor observatie van biologie, geneeskunde, microscopische deeltjes, enz.
confocale microscoop
1. Een confocale microscoop voegt een semi-reflecterende lens toe aan het gereflecteerde lichtpad, die het gereflecteerde licht dat al door de lens is gegaan in andere richtingen buigt. Er is een schot met een gaatje in het brandpunt, en het kleine gaatje bevindt zich in het brandpunt. Achter het schot bevindt zich een fotomultiplicatorbuis. Men kan zich voorstellen dat het gereflecteerde licht voor en na het detectielichtbrandpunt niet kan worden gefocusseerd op het kleine gaatje door dit confocale systeem en zal worden geblokkeerd door het schot. De fotometer meet dus de intensiteit van het gereflecteerde licht in het brandpunt.
2. Principe: Traditionele optische microscopen maken gebruik van veldlichtbronnen, en het beeld van elk punt op het preparaat wordt beïnvloed door diffractie of verstrooid licht van aangrenzende punten; Laserscanning confocale microscoop maakt gebruik van een laserstraal om een puntlichtbron te vormen door een verlicht gaatje om elk punt in het brandpuntsvlak van het monster te scannen. Het verlichte punt op het monster wordt afgebeeld bij het detectiegaatje en wordt punt voor punt of lijn ontvangen door een fotomultiplicatorbuis (PMT) of een thermo-elektrisch koppelapparaat (cCCD) na het detectiegaatje, waardoor snel een fluorescerend beeld op de computermonitor wordt gevormd scherm. Het verlichtingsgaatje en het detectiegaatje zijn geconjugeerd ten opzichte van het brandpuntsvlak van de objectieflens. De punten op het brandpuntsvlak worden tegelijkertijd scherpgesteld op het verlichtingsgaatje en het emissiegaatje, en punten buiten het brandpuntsvlak zullen niet worden afgebeeld bij het detectiegaatje. Dit resulteert in een confocaal beeld dat de optische dwarsdoorsnede van het monster vertegenwoordigt, waardoor het nadeel van wazige beelden bij conventionele microscopie wordt overwonnen.
3. Toepassingsgebieden: geneeskunde, dier- en plantenonderzoek, biochemie, bacteriologie, celbiologie, weefsels en embryo's, voedingswetenschappen, genetica, farmacologie, fysiologie, optica, pathologie, plantkunde, neurowetenschappen, mariene biologie, materiaalkunde, elektronische wetenschap, mechanica, petroleumgeologie en mineralogie.
