Wat zijn de verschillen tussen fluorescentiemicroscopie en omgekeerde microscopie?
Microscoop is een belangrijk instrument in celcultuur en gerelateerde afgeleide experimenten. Momenteel zijn er diverse soorten microscopen op de markt en het kiezen van een microscoop die voldoet aan de wensen en geschikt is, is een uitdaging. Hieronder introduceren we de principes van omgekeerde microscopen en fluorescentiemicroscopen waaruit iedereen kan kiezen.
De omgekeerde microscoop bestaat, net als een gewone microscoop, hoofdzakelijk uit drie delen: mechanisch deel, verlichtingsdeel en optisch deel.
De samenstelling van een omgekeerde microscoop is dezelfde als die van een gewone rechtopstaande microscoop, behalve dat de objectieflens en het verlichtingssysteem omgekeerd zijn, met de eerste onder het podium en de laatste boven het podium.
Deze structuur vergroot de effectieve afstand tussen het verlichtingsspotsysteem en het podium aanzienlijk, waardoor het gemakkelijker wordt om dikkere observatie-instrumenten zoals kweekschalen en celkweekflessen te plaatsen (glasplaatjes kunnen uiteraard ook worden gebruikt), terwijl de werkafstand tussen de objectieflens en het materiaal hoeft niet erg groot te zijn.
Omgekeerde microscoop wordt gebruikt door medische en gezondheidsinstellingen, universiteiten en onderzoeksinstituten voor het observeren van micro-organismen, cellen, bacteriën, weefselculturen, suspensies, sedimenten, enz. Het kan continu het proces van cel- en bacteriële proliferatie en deling in kweekmedium observeren, en kan elke vorm van dit proces vastleggen.
Op grote schaal gebruikt op gebieden zoals cytologie, parasitologie, oncologie, immunologie, genetische manipulatie, industriële microbiologie en plantkunde.
Fluorescentiemicroscopie wordt gebruikt om de absorptie, het transport, de distributie en de lokalisatie van stoffen in cellen te bestuderen.
Voor het geteste object zijn er twee manieren om fluorescentie te genereren: spontane fluorescentie, die rechtstreeks wordt uitgezonden door ultraviolette straling; Secundaire fluorescentie treedt op wanneer het waargenomen object wordt behandeld met fluorescerende kleurstoffen en wordt blootgesteld aan ultraviolet licht voordat het fluorescentie uitzendt.
Sommige stoffen in cellen, zoals chlorofyl, produceren spontane fluorescentie na blootstelling aan ultraviolette straling; Sommige stoffen zenden zelf mogelijk geen fluorescentie uit, maar als ze worden gekleurd met fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende antilichamen, kunnen ze ook secundaire fluorescentie uitstralen onder ultraviolette straling.
Een fluorescentiemicroscoop maakt gebruik van een puntlichtbron met een hoog lichtrendement om een bepaalde golflengte van licht (UV 365 nm of UV blauw 420 nm) uit te zenden via een kleurfiltersysteem als excitatielicht, dat de fluorescerende stoffen in het monster exciteert om verschillende kleuren fluorescentie uit te zenden. Daarna wordt het waargenomen door vergroting van de objectieflens en het oculair.
Op deze manier is het, zelfs met zwakke fluorescentie, gemakkelijk herkenbaar en zeer gevoelig onder sterk contrasterende achtergronden. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het bestuderen van de celstructuur, functie en chemische samenstelling.
