Welke monsterspecificaties zijn nodig voor lichtmicroscopie?
Tijdens het monstervoorbereidingsproces van de optische microscoop ligt de plakdikte van het monster tussen 2-25um; de plakdikte van de elektronenmicroscoop ligt binnen 50-100nm (behalve de hoogspanningselektronenmicroscoop, waarvan de monsterdikte 1um kan bereiken), dus de gebruikte plakmethode is niet allemaal hetzelfde.
In termen van drager is de drager van de optische microscoopsectie een glasplaatje, terwijl de drager van de elektronenmicroscoopsectie een rooster is.
Qua fixatie worden de plakjes van de optische microscoop gefixeerd met een samengesteld fixeermiddel, terwijl de plakjes van de elektronenmicroscoop herhaaldelijk worden gefixeerd met een enkel fixeermiddel.
In termen van kleuring is de kleuring van optische monsters relatief eenvoudig. Volgens verschillende observatiemonsters en soorten optische microscopen is het meestal voldoende om te kleuren met enkele vaste kleurstoffen. Er zijn veel en gecompliceerde methoden om elektronenmicroscoopmonsters opnieuw te kleuren, zoals negatieve kleuring, zilverkleuring enzovoort.
In termen van inbedding worden paraffine, collodium, gelatine, enz. Gebruikt als inbeddingsmiddelen voor optische microscoopsecties; epoxyhars, polystyreenhars, isobutyleenhars en in water oplosbare hars worden gebruikt als inbeddingsmiddelen voor elektronenmicroscoopsecties.
Om ervoor te zorgen dat het gezichtsveld van de microscoop gelijkmatig en volledig verlicht kan worden, moet het optische verlichtingssysteem worden aangepast wanneer de microscoop voor het eerst wordt geïnstalleerd en gedebugd. Dit is een belangrijk middel en de meest basale manier om de microscoop correct te gebruiken en correcte en betrouwbare resultaten te verkrijgen. vereisten. Bovendien is het correct beheersen van de aanpassing van het optische padsysteem van de verlichting een noodzakelijke stap na het vervangen van de lamp van de lichtbron tijdens het gebruik van de microscoop, en het is ook een noodzakelijk middel om de prestaties van de microscoop van tijd tot tijd dagelijks te controleren gebruik. De aanpassing van het optische padsysteem voor microscoopverlichting omvat hoofdzakelijk de volgende vier items: 1. Voorlopige aanpassing van de lichtbronlampkamer buiten de microscoop ① Open eerst de schaal van de lampkamer, druk op de veerklem om de halogeenlamp in de stopcontact, en vermijd direct contact met de lamp met uw vingers tijdens de installatie (kan worden gescheiden door een zachte doek of papier) om te voorkomen dat er vingerafdrukken en ander vuil op de lamp zitten, wat de levensduur van de lamp zal beïnvloeden. ②Zet het lamphuis op tafel, gebruik na het inschakelen van de stroom een speciale schroevendraaier om het focusknopgat van de lamp aan te passen (gemarkeerd met "←→"), zodat de gloeidraad op de muur wordt geprojecteerd 1-2 m weg, en het filamentbeeld wordt aangepast. Pas vervolgens de hoogte van de lamp aan en pas het draadgat (gemarkeerd met "──") aan om de positie van de gloeidraad geschikt te maken; pas vervolgens de linker- en rechterpositie van de lamp aan om het schroefgat aan te passen (gemarkeerd met "──") om de linker- en rechterpositie van de gloeidraad geschikt te maken.
2. Het doel van het controleren en corrigeren van de positie van de lichtbronverlichting (gloeidraad) in de microscoop is om het beelduiteinde van de verlichting recht in het gezichtsveld van de objectieflens aan te passen en ervoor te zorgen dat het gezichtsveld van de microscoop wordt volledig en gelijkmatig verlicht vanuit het perspectief van de lichtbron. Verlichting, een voorwaarde voor het aanpassen van het Kuhler-verlichtingssysteem. Benodigd basisgereedschap: De centreertelescoop wordt meegeleverd bij aankoop van de microscoop. ① Koppel de matglazen huls in het lamphuis los en plaats het lamphuis terug op de microscoop. ② Kies een 10× objectieflens, schakel het lichtbronprogramma in om het monster te vinden en scherp te stellen, en gebruik vervolgens een 40× objectieflens om het monster duidelijk te focussen (40× objectieflens U kunt het hele beeld van de gloeidraad zien ); ③ Open het diafragma en het velddiafragma van de condensor maximaal; ④ Koppel een van de oculairs los, vervang deze door een centreertelescoop, pak het witte gedeelte vast, rek het zwarte oculair uit met de andere hand. U kunt het gloeidraadbeeld in het gezichtsveld zien; ⑤ Als de positie van het filament niet geschikt is, past u het "──"-gat aan om het filamentbeeld in horizontale richting aan te passen, en past u het "──"-gat aan om het filamentbeeld in verticale richting aan te passen totdat Pas het filamentbeeld aan naar het lichte cirkelvormige beeld dat net het diafragma van de objectieflens vult; ⑥ Plaats na de aanpassing de matglazen huls terug in de oorspronkelijke positie, koppel de centreertelescoop los en vervang het oculair voor de volgende aanpassing. De bovengenoemde aanpassing van de lampkamer van de verlichtingslichtbron buiten de microscoop en de verificatie van de positie van het lichtlichaam van de lichtbron binnen de microscoop hoeven alleen te worden uitgevoerd wanneer de microscoop voor het eerst wordt geïnstalleerd en gedebugd en wanneer de lamp wordt vervangen , en de microscoop kan niet willekeurig worden aangepast bij gebruik van de microscoop. In geval van verwarring kan het volgens de bovenstaande stappen weer in de oorspronkelijke staat worden gebracht.
3. Correcte afstelling van het Kohler-verlichtingssysteem Een van de belangrijkste taken van de juiste afstelling van de microscoop is de afstelling van het optische padsysteem van de verlichting, en de sleutel is de afstelling van het Kohler-belichtingssysteem. Elke persoon die een microscoop gebruikt, vooral degenen die microfoto's maken, moet een zeker begrip en beheersing hebben van het principe van het Kuhler-verlichtingssysteem en de aanpassingsstappen om de functies van de microscoop ten volle te benutten en foto's te maken. De foto's die eruit komen, kunnen consistenter en perfecter zijn. Het principe van het Kohler-verlichtingssysteem is eenvoudig: het licht dat door een willekeurig punt op de lichtbron wordt uitgezonden, kan het gezichtsveld van de microscoop verlichten, en het licht dat door elk punt op de lichtbron wordt uitgezonden, wordt opgevangen en in het veld gezichtsveld van de microscoop Er wordt een zeer volledige en gelijkmatige verlichting bereikt. Het doel van het aanpassen van het Kuhler-verlichtingssysteem is om uniforme en voldoende verlichting te verkrijgen voor het waargenomen gezichtsveld en om te voorkomen dat strooilicht het beeldvormingssysteem beïnvloedt of verstoort, om te voorkomen dat de film tijdens het fotograferen beslaat. Noodzakelijke componenten voor een sterk afgesteld Kohler-verlichtingssysteem: velddiafragma, condensorlenssysteem dat op de as kan worden afgesteld. ① Selecteer 10× objectieflens en 10× oculair ② Plaats de frontlens van de condensor in het optische pad, stel het diafragma in op een gematigde positie (niet te groot of te klein) en breng de condensor omhoog naar de bovenste positie en stel de draaitafel van de condensor af op Helderveld "J"-positie ③ Stel het velddiafragma in op het minimum (0,1)
④ Plaats het verzegelde biologische monster op het podium, zet de lichtbron aan en focus duidelijk
⑤ Er zal een gedeeltelijk verlicht gebied of lichtpuntje in het gezichtsveld zijn, dat is het wazige beeld van het velddiafragma, waarin de details van het monster duidelijk te zien zijn; daarbuiten is een donkerder gezichtsveld, wat niet noodzakelijkerwijs de details van het monster duidelijk kan zien
⑥ Pas de condensor iets naar beneden aan, zodat de heldere vlek in het gezichtsveld geleidelijk kleiner wordt en geleidelijk een duidelijk veelhoekig beeld wordt, wat het heldere beeld is van het velddiafragma;
⑦Over het algemeen bevindt het veelhoekige beeld zich niet in het midden van het gezichtsveld en is het nodig om een paar centreerschroeven van de condensor aan te passen om het veelhoekige beeld van het velddiafragma in de centrale positie aan te passen;
⑧ Open geleidelijk het diafragma van het gezichtsveld om het polygoonbeeld een ingeschreven polygoon van het gezichtsveld te maken en controleer verder de uitlijningsstatus. Als de uitlijning niet ideaal is, ga dan verder met het fijn afstellen van de uitlijnschroef;
⑨Open het diafragma van het gezichtsveld enigszins, zodat het veelhoekige beeld net aan de rand van het gezichtsveld verdwijnt. Tot nu toe is de aanpassing van het Kohler-verlichtingssysteem voltooid. Nadat het Kohler-verlichtingssysteem is aangepast, wordt het hele gezichtsveld gelijkmatig verlicht en zijn de gemaakte microfoto's helder en duidelijk met een normaal contrast.
