Werkingsprincipe van laserconfocale microscoop
Werkingsprincipe van laserconfocale microscoop
Olympus laser confocale microscoop is een detector die signalen kan verzamelen. Het werkingsprincipe is dat een puntlichtbron wordt afgebeeld als een vergrote vlek genaamd "Airy disk" nadat hij door een fluorescentiemicroscoop is gegaan. In een standaard interferometrische confocale microscoop met wit licht wordt licht dat buiten het brandpuntsvlak wordt uitgezonden, geblokkeerd door een gaatje waarvan de grootte bepaalt hoeveel van de Airy-schijf de detector kan binnendringen. Hoe kleiner het gaatje, hoe scherper het resulterende beeld en hoe zwakker het beeld omdat het meeste licht verloren gaat. Hoe kleiner het gaatje in de opening, hoe beter de resolutie, maar – nogmaals – hoe meer lichtsignaal verloren gaat. De confocale lasermicroscoop van Olympus kan tegelijkertijd een CCD-kleurenbeeld en een confocaal laserscanningbeeld leveren. Confocale lasermicroscopen van Olympus zijn in staat hoogtemetingen uit te voeren via een confocale opstelling van één lichtbron, één monster en één detector. Wanneer het monster zich in het brandpuntsvlak van de objectieflens bevindt en het door het monsteroppervlak gereflecteerde laserlicht wordt gefocusseerd in de confocale opening, zal de fotodetector het signaal van het monster ontvangen. Wanneer het monster zich in de onscherpe positie bevindt, ontvangt de confocale opening het lasersignaal niet, zodat alleen het in focussignaal wordt verzameld. Deze functie kan de optische snijfunctie van de Olympus laserconfocale microscoop realiseren.
Voordelen van confocale lasermicroscopie
1. Met behulp van laserlicht als lichtbron wordt het monster, nadat de overeenkomstige fluorescerende sondes zijn gemarkeerd, punt voor punt gescand om laag voor laag tweedimensionale optische dwarsdoorsnedebeelden te verkrijgen. Het heeft de functie van "cel-CT" en kan worden ondersteund door driedimensionale computerreconstructiesoftware om driedimensionale beelden te verkrijgen, die onder elke hoek kunnen worden geroteerd om de driedimensionale vorm en ruimtelijke relatie van cellen en weefsels te observeren;
2. Het kan levende cellen en weefsels zonder schade observeren en dynamisch de fysiologische informatie van levende cellen meten, zoals de Ca-ionenconcentratie en de pH-waarde in cellen;
3. Het kan de vloeibaarheid van het celmembraan, intercellulaire communicatie, celfusie, elasticiteit van het cytoskelet, enz. meten, en kan worden gebruikt als een "licht mes" om intracellulaire "chirurgie" te voltooien. Deze technologie maakt in situ dynamische en kwantitatieve observatie en meting van levende cellen en weefsels mogelijk.
