Toepassing en gebruik van fluorescentiemicroscoopprincipes
Principes en structurele kenmerken van fluorescentiemicroscopen: Fluorescentiemicroscopen gebruiken een puntlichtbron met een hoge lichtefficiëntie om licht van een bepaalde golflengte (zoals ultraviolet licht 3650 inch of paarsblauw licht 4200 inch) uit te zenden via een kleurenfiltersysteem als excitatielicht om de fluorescentie in het monster opwekken. Nadat de stof fluorescentie van verschillende kleuren uitzendt, wordt deze vervolgens waargenomen door de vergroting van de objectieflens en het oculair. Op deze manier is het onder een sterk contrasterende achtergrond, zelfs als de fluorescentie erg zwak is, gemakkelijk te identificeren en heeft het een hoge gevoeligheid. Het wordt voornamelijk gebruikt voor de studie van de celstructuur en -functie, evenals de chemische samenstelling. De basisstructuur van een fluorescentiemicroscoop bestaat uit een gewone optische microscoop plus enkele accessoires (zoals een fluorescentielichtbron, excitatiefilter, tweekleurige bundelsplitser, blokkeerfilter, enz.). Fluorescerende lichtbron - maakt doorgaans gebruik van een ultrahogedrukkwiklamp (50 tot 200 W), die licht van verschillende golflengten kan uitzenden, maar elke fluorescerende stof heeft een excitatiegolflengte die de sterkste fluorescentie produceert, dus een excitatiefilter (er zijn over het algemeen ultraviolette, paarse, blauwe en groene excitatiefilters), die alleen het excitatielicht van een bepaalde golflengte doorlaten en het monster verlichten, terwijl al het andere licht wordt geabsorbeerd. Nadat elke stof is bestraald met excitatielicht, zendt deze in zeer korte tijd zichtbare fluorescentie uit met een langere golflengte dan de bestralingsgolflengte. Fluorescentie is specifiek en is over het algemeen zwakker dan het excitatielicht. Om specifieke fluorescentie waar te nemen, is achter de objectieflens een blokkerend (of onderdrukkend) filter nodig. Het heeft twee functies: de eerste is het absorberen en blokkeren van het excitatielicht dat het oculair binnendringt om te voorkomen dat de fluorescentie wordt verstoord en de ogen worden beschadigd; de andere is het selecteren en doorlaten van specifieke fluorescentie om een specifieke fluorescentiekleur weer te geven. De twee filters moeten samen worden geselecteerd en gebruikt.
