Bepaling van de microbiële populatie - directe microscopische telmethode!
I. Doelvereisten
1, om het principe van het tellen van hematocrietplaten te verduidelijken.
2, Beheers de methode van microbiële telling met behulp van hematocrietplaat.
II. Basisprincipes
De directe telmethode onder de microscoop is een kleine hoeveelheid suspensie van het te testen monster op een speciaal objectglaasje met een gedefinieerd oppervlak en volume (ook bekend als de bacteriologische teller), waarbij in de microscoop direct wordt geteld, een eenvoudige, snelle, intuïtieve methode. Momenteel zijn de binnen- en buitenlandse veelgebruikte bacteriologische tellers: de plaat voor het tellen van bloedcellen, de bacteriologische tellers van Peteroff-Hauser en de bacteriologische tellers van Hawksley, enz., die kunnen worden gebruikt voor gist, bacteriën, schimmelsporen en andere opschortingen van het tellen, het basisprincipe is hetzelfde. De laatste twee typen tellers hebben een totaal volume van 0.02 mm3 nadat het dekglaasje is aangebracht, en de afstand tussen het dekglaasje en het draagplakje is slechts 0,02 mm, dus kleinere cellen zoals Met een olie-immersiedoelstelling kunnen bacteriën worden waargenomen en geteld. Naast het gebruik van deze tellers bestaat er ook een schattingsmethode van de verhouding tussen het uitstrijkoppervlak en het gezichtsveld dat direct onder de microscoop wordt waargenomen, die doorgaans wordt gebruikt voor bacteriologisch onderzoek van koemelk. De voordelen van de directe microscooptelmethode zijn intuïtief, snel en eenvoudig te bedienen. Het nadeel van deze methode is echter dat het resultaat meestal de som is van dode en levende organismen. Er zijn enkele methoden om dit nadeel te ondervangen, zoals de combinatie van met levende bacteriën gekleurde microkamercultuur (korte tijd) en de toevoeging van cytokineseremmers om het doel te bereiken om alleen levende organismen te tellen.
Bedieningsstappen
1, voorbereiding van bacteriële suspensies
Gebruik een steriele zoutoplossing om een bacteriële suspensie van biergist met de juiste concentratie te maken.
2, spiegeltelkamer
Voordat monsters worden toegevoegd, moet eerst de telkamer van de telplaat worden geïnspecteerd. Als er vuil aanwezig is, moet dit vóór het tellen worden schoongemaakt en drooggeblazen.
3, monsters toevoegen
Reinig en droog de plaat voor het tellen van bloedcellen, bedekt met een dekglaasje, en gebruik vervolgens een steriele capillaire buret om de biergistsuspensie van de rand van het dekglaasje te schudden om een kleine druppel te laten vallen, zodat de bacteriële vloeistof langs de opening door capillaire penetratie in de telkamer automatisch, over het algemeen kan de telkamer worden gevuld met bacteriële vloeistof. Bij het nemen van monsters dient de bacteriële oplossing eerst goed geschud te worden; bij het toevoegen van monsters mag de telkamer geen luchtbellen bevatten.
4, Microscoop tellen
Laat het monster na het toevoegen 5 minuten rusten, plaats vervolgens de bloedceltelplaat op het microscoopdraagplatform, zoek eerst de locatie van de telkamer met een lage vergroting en verander deze vervolgens naar een hoge vergroting om te tellen. Pas de intensiteit van het licht van de microscoop op de juiste manier aan, want de microscoop met een reflectorlicht moet er ook op letten dat het licht niet naar één kant wordt bevooroordeeld, anders is het gezichtsveld niet gemakkelijk te onderscheiden van de telkamerrasterlijn, of zie alleen de verticale lijn of zie alleen de horizontale lijn. Als de bacteriële vloeistof vóór het tellen te dik of te dun blijkt te zijn, moet de verdunning vóór het tellen opnieuw worden aangepast. Algemene vereisten voor monsterverdunning van ongeveer 5 tot 10 bacteriën in elke cel zijn geschikt. Voor elke telkamer worden de organismen in 5 middencompartimenten (4 hoeken en één middencompartiment in het midden) geselecteerd om te tellen. De organismen die zich op de rasterlijnen bevinden, worden meestal alleen op de bovenste en rechter lijnen geteld. In het geval van gistontluiking, wanneer het ontluikende lichaam de helft van de grootte van de moedercel bereikt, wordt het als twee organismen geteld. Het tellen van een monster uit de twee telkamers in de gemiddelde waarde om het bacteriegehalte van het monster te berekenen.
5. Reiniging van de hematocrietplaat
Spoel de bloedceltelplaat na gebruik af met water onder de kraan, gebruik geen harde voorwerpen om te wassen en te borstelen, droog hem zelf af of gebruik een föhn om hem na het wassen droog te föhnen. Inspecteer de plaat microscopisch om te zien of er in elk compartiment resterende organismen of andere neerslag aanwezig zijn. Als het niet schoon is, moet het wassen worden herhaald totdat het schoon is.
