Direct tellen van micro-organismen met een microscoop
Experimenteel principe
Direct tellen onder een microscoop met behulp van een hemocytometer is een veelgebruikte microbiële telmethode. Het voordeel van deze methode is dat deze intuïtief en snel is. Plaats de op de juiste manier verdunde bacteriesuspensie (of sporensuspensie) in de telkamer tussen het objectglaasje en het dekglas van de hemocytometer en tel onder de microscoop. Omdat het volume van de telkamer vast staat (0.1 mm2), kan dit worden omgezet in het totale aantal micro-organismen per volume-eenheid, afhankelijk van het aantal micro-organismen dat onder de microscoop wordt waargenomen. Omdat deze methode de som van levende en dode bacteriën telt, wordt dit ook wel de totaaltellingmethode genoemd.
Een hemocytometer is meestal een speciaal glasplaatje waarop vier groeven drie platforms vormen. Het platform in het midden is door een korte horizontale groef in twee helften verdeeld. Aan elke kant is op het platform een rooster gegraveerd. Elk raster is verdeeld in negen grote vierkanten. Het grote plein in het midden is de telkamer. In de telkamer worden micro-organismen geteld. De structuur van het bord voor het tellen van bloedcellen wordt weergegeven in figuur Ⅷ-1.
De schaal van de telkamer heeft over het algemeen twee specificaties: één is dat een groot vierkant is verdeeld in 16 middelste vierkanten, en elk middelste vierkant is verdeeld in 25 kleine vierkanten (Figuur Ⅷ-2); de andere is een groot vierkant. Het vierkant is verdeeld in 25 middelste vierkanten, en elk middelste vierkant is verdeeld in 16 kleine vierkanten (Figuur Ⅷ-1, C). Maar wat voor soort telbord het ook is, het aantal kleine vierkantjes in elk groot vierkant is hetzelfde, dat wil zeggen 16×25=400 kleine vierkantjes, zoals weergegeven in figuur Ⅷ-2.
De zijdelengte van elk groot vierkant is 1 mm, en de oppervlakte van elk groot vierkant is 1 mm2. Nadat het dekglas is afgedekt, bedraagt de hoogte tussen het schuifglas en het dekglas 0.1 mm, zodat het volume van de telkamer 0.1 mm3 is.
Tel bij het tellen meestal het totale aantal bacteriën in de vijf middelste roosters, verkrijg vervolgens de gemiddelde waarde van elk middelste rooster en vermenigvuldig dit vervolgens met 16 of 25 om het totale aantal bacteriën in een groot rooster te krijgen, en vervolgens geconverteerd naar de totaal aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing.
Labuitrusting
Hemocytometer, microscoop, dekglaasje, steriel capillair;
Experimentele materialen
Saccharomyces cerevisiae-suspensie
Experimentele procedure (directe telmethode met microbiële microscoop)
1. verdunning
Verdun de Saccharomyces cerevisiae-suspensie op de juiste manier. Als de bacteriële oplossing niet dik is, hoeft deze niet te worden verdund.
2. Microscopische telkamer
Voordat u monsters toevoegt, voert u een microscopische inspectie van de telkamer van de telplaat uit. Als er vuil aanwezig is, moet dit vóór het tellen worden schoongemaakt.
3. monster toevoegen
Bedek de schone en droge hemocytometerplaat met een dekglaasje en gebruik vervolgens een steriele druppelaar met fijne mond om een kleine druppel van de verdunde Saccharomyces cerevisiae-oplossing vanaf de rand van het dekglas te laten vallen (niet te veel), zodat de bacterieoplossing ligt dicht bij de opening langs de opening. Capillaire osmose komt vanzelf de telkamer binnen en de algemene telkamer kan worden gevuld met bacteriële vloeistof. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen ontstaan.
4. Microscooptelling
Na 5 minuten rusten plaatst u de hemocytometer op het podium van de microscoop, gebruikt u eerst een lens met laag vermogen om de locatie van de telkamer te vinden en schakelt u vervolgens over naar een lens met hoog vermogen om te tellen. Als vóór het tellen blijkt dat de bacteriële oplossing te dik of te dun is, moet de verdunning vóór het tellen opnieuw worden aangepast. Over het algemeen zijn voor de monsterverdunning ongeveer 5-10 bacteriën in elke cel nodig. Elke telkamer selecteert de bacteriën in 5 middelste roosters (optioneel 4 hoeken en centrale roosters) om te tellen. De bacteriën op de rasterlijn worden doorgaans alleen op de bovenste en rechter lijnen geteld. In het geval van gistontluiking, wanneer de grootte van het knoplichaam de helft van de moedercel bereikt, tel dan twee bacteriën. Tel een monster om het bacteriegehalte van het monster te berekenen op basis van de waarden die in de twee telkamers zijn geteld.
5. De hemocytometer reinigen
Spoel na gebruik de bloedceltelplaat op de kraan af met waterstralen, was hem niet met harde voorwerpen en droog hem na het wassen zelf of met een föhn. Microscopisch onderzoek, kijk of er in elke cel resterende bacteriën of andere sedimenten zitten. Als het niet schoon is, moet het herhaaldelijk worden gewassen totdat het schoon is.
