Experimentele principes van de directe telmethode van microbiële microscopie
Direct tellen onder een microscoop met behulp van een hemocytometer is een veelgebruikte methode voor het tellen van micro-organismen. Het voordeel van deze methode is dat deze intuïtief en snel is. Plaats de op de juiste manier verdunde bacteriesuspensie (of sporensuspensie) in de telkamer tussen het objectglaasje en het dekglaasje van de hemocytometer en tel onder een microscoop. Omdat het volume van de telkamer vaststaat (0.1 mm2), kan dit worden omgezet in het totale aantal micro-organismen per volume-eenheid op basis van het aantal micro-organismen dat onder de microscoop wordt waargenomen. Omdat deze methode het totaal aantal levende en dode bacteriën telt, wordt dit ook wel de totale kiemtellingsmethode genoemd.
Een hemocytometer is meestal een speciaal objectglaasje met vier sleuven die drie platforms vormen. Het middelste platform is door een korte horizontale groef in twee helften verdeeld. Aan elke kant is een vierkant raster op het platform gegraveerd. Elk vierkant raster is verdeeld in negen grote vierkanten. Het grote plein in het midden is de telkamer. Het tellen van micro-organismen vindt plaats in de telkamer. De structuur van de hemocytometer wordt weergegeven in figuur Ⅷ-1.
De schaal van de telkamer heeft doorgaans twee specificaties. De ene is een groot vierkant verdeeld in 16 middelgrote vierkanten, en elk middelgroot vierkant is verdeeld in 25 kleine vierkanten (Figuur Ⅷ-2); de andere is een groot vierkant. Het vierkante raster is verdeeld in 25 middelgrote vierkanten, en elk middelgroot vierkant is verdeeld in 16 kleine vierkanten (Figuur VIII-1, C). Maar wat voor soort telbord het ook is, het aantal kleine vierkantjes in elk groot vierkant is hetzelfde, dat wil zeggen 16×25=400 kleine vierkantjes, zoals weergegeven in figuur Ⅷ-2.
De zijdelengte van elk groot vierkant is 1 mm, dus de oppervlakte van elk groot vierkant is 1 mm2. Nadat het dekglas is afgedekt, is de hoogte tussen het objectglaasje en het dekglas 0.1 mm, dus het volume van de telkamer is 0.1 mm3.
Tel bij het tellen meestal het totale aantal bacteriën in vijf middelgrote vierkanten, bepaal vervolgens de gemiddelde waarde van elk middelste vierkant en vermenigvuldig dit vervolgens met 16 of 25 om het totale aantal bacteriën in een groot vierkant te krijgen, en bereken vervolgens de conversie naar de totaal aantal bacteriën in 1 ml bacteriële oplossing.
