Hoe u de juiste fluorescentiemicroscoop kiest
Fluorescentiemicroscoop is een standaard microscopische beeldvormingsapparatuur voor laboratoria en pathologieafdelingen. Het gebruikt fluorescentiekarakteristieken voor observatie en beeldvorming. Het wordt veel gebruikt in celbiologie, neurobiologie, plantkunde, microbiologie, pathologie, genetica en andere gebieden. Fluorescentiebeeldvorming heeft de voordelen van hoge gevoeligheid en hoge specificiteit, en is zeer geschikt voor de observatie van de verdeling van specifieke eiwitten en organellen in weefsels en cellen, de studie van colokalisatie en interactie, het volgen van levensdynamische processen zoals veranderingen in ionenconcentratie , enz.
Keuze van microscoop
Fluorescentiemicroscopen zijn grofweg in te delen in drie categorieën: rechtopstaande fluorescentiemicroscopen (geschikt voor coupes), omgekeerde fluorescentiemicroscopen (geschikt voor levende cellen, rekening houdend met coupes), stereoscopische fluorescentiemicroscopen (geschikt voor grotere exemplaren, zoals planten, zebravissen (volwassen/ embryo), medaka, organen van muizen/ratten, enz.).
Selectie van fluorescentiefilterkubussen
Naast het overwegen van de excitatie- en emissiegolflengten van fluorescerende sondes, moet bij de selectie van filterblokken ook worden overwogen of er niet-specifieke excitatie en kruiskleur is voor monsters met meerdere kleuren. In het experiment zullen we proberen de golflengte te kiezen die het dichtst bij de excitatiepiek ligt voor excitatie, en het ontvangstbereik moet de emissiepiek omvatten. De excitatiepiek van Alexa Fluor 488 is bijvoorbeeld 500 nm en een 480/40 excitatiefilter kan worden geselecteerd in een fluorescentiemicroscoop. Fluorescentiefilterblokjes die gewoonlijk in fluorescentiemicroscopen worden gebruikt, kunnen in twee typen worden verdeeld: long pass (LP voor kort) en band pass (BP voor kort), die ook moeten worden geselecteerd op basis van de behoeften.
Keuze van fluorescerende lichtbron
Momenteel veelgebruikte fluorescentielichtbronnen zijn kwiklampen, metaalhalogenidelampen en LED-lichtbronnen die zich de afgelopen jaren snel hebben ontwikkeld. Het spectrum van de fluorescerende lichtbron is continu en discontinu en de energie zal in verschillende banden verschillend zijn. Vanwege de relatief smalle spectrale band, stabielere energie-output, lange levensduur, veiligheid en milieubescherming en vele andere voordelen, wordt LED-lichtbron geleidelijk de belangrijkste lichtbron van fluorescentiemicroscoop.
confocale microscoop
Bij traditionele fluorescentiemicroscoopobservatie zijn ze, vanwege de overlapping van fluorescerende markersubstanties en autofluorescentiestructuren, nauw gecombineerd, terwijl de traditionele epifluorescentiemicroscoopobjectieflens niet alleen licht van het brandpuntsvlak verzamelt, maar ook verstrooid licht boven en onder de brandpuntsvlak , wat resulteert in een sterk verminderde beeldresolutie en contrast.
Confocale beeldvorming lost dit probleem op door alleen het deel van het licht te detecteren dat wordt gereflecteerd door het brandpuntsvlak. De lichtbron gaat door een gaatje om een kleine en fijne lichtvlek op het brandpuntsvlak te vormen. Het door het brandpuntsvlak uitgestraalde licht wordt opgevangen door de objectieflens. Het grootste deel van de fluorescentie die wordt uitgezonden vanaf het punt boven of onder het brandpuntsvlak van de objectieflens kan niet convergeren naar het kleine gaatje. Alleen de fluorescentie in het brandpuntsvlak en een klein deel van de off-focus fluorescentie kunnen door het gaatje gaan, terwijl de lichtstralen buiten het brandpuntsvlak samenkomen aan de voor- of achterkant van de gaatjesplaat en worden geblokkeerd om de detector binnen te gaan door het gaatje. Het gedetecteerde beeld is het beeld van het brandpuntsvlak, dus de uiteindelijke beeldkwaliteit is aanzienlijk verbeterd.
Vanwege de voordelen en bruikbaarheid van de functies van de laser scanning confocale microscoop, is de confocale microscoop een onmisbare experimentele assistent op het gebied van zeer nauwkeurige celbiologie, plantkunde en celonderzoek. Tegelijkertijd zal het in het toekomstige wetenschappelijke onderzoekscentrum het meest elementaire en belangrijkste wetenschappelijke onderzoeksinstrument zijn.
