Beeldvormingsmethoden voor helder-veld en donker-veld in fluorescentiemicroscopie
(1) Bright field imaging (BFI)-methode, waarbij alleen de uitgezonden elektronenbundel in het paraxiale gebied door de objectiefopening kan gaan en een donker beeld op een heldere achtergrond vormt. Hoe kleiner de opening van de objectieve opening, hoe groter het contrast van het helderveldbeeld; (2) Donkerveldbeeldvorming (DFI) is een techniek die slechts een deel van de verstrooide bundel onder een grote hoek of een bepaalde diffractiebundel van het kristal door de objectiefopening laat passeren, terwijl de doorgelaten bundel wordt geblokkeerd. Hierdoor ontstaat een helder grafisch beeld op een donkere achtergrond. Deze donkerveldbeeldvormingsmethode kan het contrast van beelden verbeteren en is een belangrijke beeldvormingstechniek.
Er zijn grofweg vier methoden voor het verkrijgen van donkerveldbeelden met behulp van Leica-fluorescentiemicroscopen: (1) het handhaven van verticale verlichting langs de optische as terwijl de objectiefopening wordt verplaatst; (2) Het gebruik van schuine verlichting om verstrooide bundels in de richting van de optische as op te vangen wordt Central Dark Field Imaging (CDFI) genoemd; (3) Een objectiefopening met een centrale bundelstop en een cirkelvormig transparant gebied; (4) Gebruik een ronde transparante condensorlens voor lichtwaarneming en een centrale ronde opening voor de objectieflens. De *-methode is hier het meest eenvoudig, maar maakt gebruik van elektronische beeldvorming in het distale gebied van de huls, waardoor de aberratie groot is en de beeldkwaliteit niet erg goed is. De tweede methode kan de bovenstaande nadelen vermijden, maar de objectiefopening van de Leica fluorescentiemicroscoop ontvangt slechts een klein deel van de verstrooide afgebogen elektronen, wat resulteert in een lagere efficiëntie. De zijkant van de opening wordt vaak onderworpen aan een grote hoeveelheid elektronenbombardement, wat gemakkelijk asymmetrische verontreiniging kan veroorzaken en de beeldkwaliteit kan beïnvloeden. De ringvormige objectieflens is in dit opzicht verbeterd, maar het nadeel is dat deze moeilijk te produceren is en dat het moeilijk is om volledige axiale symmetrie te bereiken. Gegeven de relatief ontspannen eisen aan het verlichtingssysteem, kan de laatste oplossing worden toegepast, waarbij een ringvormige opening aan de condensor wordt toegevoegd om het monster met holle stralen te verlichten. Het effect van dit apparaat. De beeldresolutie kan dicht bij die van helderveldbeelden liggen, terwijl het contrast aanzienlijk wordt verbeterd.
