Diktevereisten voor optische microscoop voor objectglaasjes
Microscopische uitdroging en monsterbevestiging: door herhaald centrifugeren gaan de cellen verloren, dus het is het beste om de cellen aan het oppervlak van een glasplaatje of plastic vel te bevestigen voor optische microscopie, zodat de cellen worden uitgedroogd en samen met het glas worden gedroogd glijbaan of plastic vel. Eisen aan de dikte van objectglaasjes in optische microscopie Om cellen te laten hechten aan objectglaasjes of plastic platen, is het noodzakelijk om eerst een laag film op glasplaatjes of plastic platen te leggen. De methode om de film te leggen is als volgt:
(1) De eenvoudigste methode voor optische microscopie is het aanbrengen van een dunne laag polyvinylformal (formvar) film. Week de gereinigde objectglaasjes in (0.5-1) procent polyvinylformalchloroformoplossing. Nadat de atmosfeer is vervluchtigd, verschijnt er een witte film op de dia's. Schud de glaasjes meerdere keren in de chloroform om de film te laten veranderen. Dun en klaar voor gebruik.
(2) Druppel 0.1 latitude poly-L-lysine (los 1 mg poly-lysine op in 1 ml gefilterd water tijdens bereiding) op het gereinigde objectglaasje en plaats het in een voorraaddoos van 450C nadat de druppel zich heeft ontvouwd . droog. Deze methode is het beste omdat poly-L-lysine positief geladen is, waardoor er meer negatief geladen cellen aan het oppervlak kunnen hechten.
(3) Voeg plasma en glycerol toe aan gedestilleerd water in een verhouding van (30--40) procent en (3-5) procent volgens de vereisten van de optische microscoop voor de dikte van het objectglaasje om een glyceroleiwit te vormen oplossing. De vloeistof wordt op het gereinigde objectglaasje gedruppeld, uitgevouwen en onder de optische microscoop gedroogd. De gelegde eiwitfilm wordt ondergedompeld in 2 procent glutaaraldehyde om het eiwit te fixeren, gewassen en gedroogd voor later gebruik. Voor gebruik wordt het plasma op de eiwitfilm gedruppeld. Maak het "geactiveerd", spoel na 30 minuten met buffer en het kan direct worden aangebracht.
Van de gefixeerde en gereinigde cellen wordt met gefilterd water onder een digitale microscoop een geschikte concentratie celsuspensie gemaakt en de optische microscoop wordt op een glasplaatje of plastic plaat geplaatst die is bedekt met een membraan en in een vochtige, lage ruimte geplaatst. temperatuur (40C) omgeving (30-120) minuten zodat de cellen zich aan het membraan kunnen hechten. Gebruik een fijne pincet om het objectglaasje op te pakken en schud het in schoon dubbel gedestilleerd water en was losse cellen weg met een optische microscoop. Eisen aan de dikte van objectglaasjes in optische microscopen Polarisatiemicroscopen worden vervolgens snel in een vat geplaatst dat voor 50 procent met aceton (of ethanol) is gevuld. Het dehydratatieproces is om de objectglaasjes elke 3 minuten met toenemende concentratie in aceton of ethanol te plaatsen, en de optische microscoop of continu de concentratie van het dehydratatiemiddel in de glazen objectglaasjescontainer te verhogen. Volgens de laboratoriumervaring van de auteur is de laatste bewerking handiger. De specifieke methode van optische microscopie kan elke 3 minuten de helft van het uitdrogende middel in de container wegzuigen en vervolgens een gelijke hoeveelheid uitdrogend middel toevoegen met een concentratie van 100 procent. Na 5-6 operaties bereikt de concentratie van het uitdrogende middel in het prijsvat van de microscoop meer dan 0,5 procent en worden de cellen met succes uitgedroogd. Na het drogen op het kritieke punt wordt het glasplaatje of de plastic plaat op de monsterpier gelijmd met geleidende lijm voor metaalcoating. Er zijn ook gemakken voor het bevestigen van cellen aan membranen die zijn vastgelegd door de derde methode. Met een optische microscoop kunnen de cellen worden gefixeerd door een lage concentratie glutaaraldehyde op de "geactiveerde" eiwitfilm. De optische microscoop vereist dat de dikte van het objectglaasje gedurende 10 minuten wordt geplaatst en het objectglaasje of plastic vel wordt gedrenkt in 2 procent glutaaraldehyde. Na 30 minuten spoelen met gefilterd dubbel gedestilleerd water en vervolgens dehydrateren, drogen en metalliseren volgens de bovenstaande methode.
