Bereiding en observatie van biologische monsters voor elektronenmicroscopen
De resolutie van een microscoop hangt af van de golflengte van het gebruikte licht. De elektronenmicroscoop, die in 1933 op de markt kwam, bereikte een aanzienlijk hogere resolutie dan een optische microscoop dankzij het gebruik van elektronenbundels met golflengten die veel korter zijn dan zichtbaar licht als lichtbronnen. De verschillende lichtbronnen bepalen ook een reeks verschillen tussen elektronenmicroscopen en optische microscopen.
Gebaseerd op de verschillen in de principes van elektronenbundelbeeldvorming en de manier waarop ze op monsters inwerken, hebben moderne elektronenmicroscopen zich in vele typen ontwikkeld. Momenteel worden transmissie-elektronenmicroscopen en scanning-elektronenmicroscopen het meest gebruikt. De eerste heeft een totale vergroting die kan variëren tussen 1000-10000000 keer, terwijl de laatste een totale vergroting heeft die kan variëren tussen 20-300.000 keer. Dit experiment introduceert voornamelijk de bereiding van twee soorten microscoopmonsters: transmissie-elektronenmicroscopie en scanning-elektronenmicroscopie.
2, uitrusting
1. De stam Escherichia coli is hellend.
2. Oplossing of reagens: pentylacetaat, geconcentreerd zwavelzuur, watervrije ethanol, steriel water, 2% natriumfosfowolframaat (pH 6,5-8,0) waterige oplossing, 0,3% polyvinylformaldehyde (opgelost in chloroform) oplossing, cytochroom c, ammoniumacetaat, plasmide pBR322.
3. Instrumenten of ander gereedschap omvatten gewone optische microscopen, koperen netten, porseleinen trechters, bekers, petrischalen, steriele druppelaars, steriele pincetten, pennen, objectglaasjes, telplaten, vacuümcoatingmachines, drogers voor kritische punten, enz.
3, bedieningsstappen
(1) Voorbereiding en observatie van monsters voor transmissie-elektronenmicroscopie
1. Behandeling van metalen gaas
Het monster van een optische microscoop wordt ter observatie op een glasplaatje geplaatst. Omdat elektronen in een transmissiespiegel echter niet door de glasplaat kunnen dringen, kan een gaasmateriaal alleen als drager worden gebruikt, gewoonlijk een dragergaas genoemd. Het draaggaas kan vanwege de verschillende materialen en vormen in verschillende specificaties worden verdeeld, waaronder vaak kopergaas met maaswijdte 200-400 (aantal gaten). Kopergaas moet vóór gebruik worden behandeld om vuil te verwijderen en schoon te houden, anders heeft dit invloed op de kwaliteit van de ondersteunende film en de helderheid van de voorbeeldfoto's. Het in dit experiment gebruikte kopergaas van 400 mesh kan op de volgende manier worden behandeld: eerst een paar uur laten weken en laten drijven met pentylacetaat, vervolgens meerdere keren spoelen met gedestilleerd water en tenslotte het kopergaas onderdompelen en laten drijven in watervrije ethanol voor dehydratatie. Als het kopergaas na de bovenstaande methoden nog steeds niet schoon is, kan het gedurende 1-2 minuten worden gedrenkt in verdund geconcentreerd zwavelzuur (1:1), of een paar minuten worden gekookt in een 1% NaOH-oplossing, meerdere keren worden gespoeld met gedestilleerd water en vervolgens worden gedehydrateerd in watervrije ethanol voor later gebruik.
