Voorbereiden en observeren van biologische monsters voor elektronenmicroscopie
De resolutie van de microscoop hangt af van de golflengte van het gebruikte licht. De elektronenmicroscoop begon in 1933 te verschijnen en is te danken aan het gebruik van een veel kortere golflengte dan het zichtbare licht van de elektronenbundel als lichtbron, zodat de resolutie ervan kan bereiken dan de optische microscoop aanzienlijk is verbeterd. De verschillende lichtbron bepaalt ook een reeks verschillen tussen de elektronenmicroscoop en de optische microscoop.
Volgens de verschillen in het beeldvormingsprincipe van de elektronenbundel en de rol van het monster op de verschillende manieren, is de moderne elektronenmicroscoop ontwikkeld om een aantal typen te vormen, momenteel * algemeen gebruikt zijn de transmissie-elektronenmicroscoop en scannende elektronenmicroscoop microscoop, de eerste kan liggen in het bereik van 1,000-1,000,000 maal de totale vergroting van het bereik van veranderingen, de laatste kan liggen in de totale vergroting van de { {4}},000 maal de totale vergroting van de veranderingen ertussen. Dit experiment richt zich op de voorbereiding van monsters voor de twee soorten microscopen, de transmissie-elektronenmicroscoop en de scanning-elektronenmicroscoop.
Materialen
1. Stam Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) schuin.
2. Oplossingen of reagentia Amylacetaat, geconcentreerd zwavelzuur, watervrije ethanol, steriel water, 2% natriumfosfowolfraamzuur (pH 6.5-8.0) waterige oplossing, 0,3% polyvinylformaldehyde (opgelost in trichloormethaan) oplossing, cytochroom c, ammoniumacetaat, plasmide pBR322.
3. Instrumenten of andere parafernalia Gewone optische microscoop, kopergaas, porseleinen trechter, beker, platte schaal, steriele buret, steriele pincet, lancet, objectglaasjes, ** telplaat, vacuümcoater, droger voor kritische punten enzovoort.
Bedieningsstappen
(I) Monstervoorbereiding en observatie van transmissie-elektronenmicroscopie
1. Behandeling van metalen gaas
Monsters voor optische microscopie worden ter observatie op objectglaasjes geplaatst. Omdat bij transmissie-elektronenmicroscopie echter elektronen de glasplaat niet kunnen binnendringen, kan alleen gaasmateriaal als drager worden gebruikt, gewoonlijk dragergaas genoemd. Het draaggaas kan vanwege de verschillende materialen en vormen in veel verschillende specificaties worden verdeeld, waarvan * het meest gebruikte gaas het 200-400 gaas (aantal gaten) kopergaas is. Kopergaas moet vóór gebruik worden behandeld om het vuil te verwijderen en schoon te houden, anders heeft dit invloed op de kwaliteit van de ondersteunende film en de helderheid van de voorbeeldfoto's. Het bij dit experiment gebruikte kopergaas is 400 mesh en kan op de volgende manier worden behandeld: bleek het eerst een paar uur met amylacetaat, spoel het vervolgens een aantal keren met gedestilleerd water en bleek het vervolgens gedurende een paar uur in watervrije ethanol. uitdroging. Als het kopergaas volgens de bovenstaande methode nog steeds niet schoon is, kan het worden gebruikt om geconcentreerd zwavelzuur (1:1) te verdunnen, ondergedompeld in 1 ~ 2 minuten, of in 1% NaOH-oplossing, enkele minuten gekookt, meerdere keren gespoeld met gedestilleerd water , geplaatst in watervrije ethanol-dehydratatie, te gebruiken.
2. Voorbereiding van steunfilm
Bij de monsterobservatie moet het dragernetwerk ook bedekt zijn met een laag ongestructureerde, uniforme film, anders zullen kleine monsters uit de gaten in het dragernetwerk lekken. Deze filmlaag wordt meestal de steunfilm of dragerfilm genoemd. De steunfilm moet transparant zijn voor elektronen en de dikte ervan moet in het algemeen minder dan 20 nm zijn; onder invloed van de elektronenbundel moet de film ook een bepaalde mate van mechanische sterkte hebben, de stabiliteit van de structuur kunnen behouden en een goede thermische geleidbaarheid hebben; bovendien mag het ondersteuningsnetwerk geen zichtbare structuur hebben onder de elektronenmicroscoop, geen chemische reactie hebben met het gedragen monster, en de observatie van het monster niet verstoren, en de dikte ervan is over het algemeen ongeveer 15 nm. De steunfilm kan gemaakt zijn van plastic film (bijvoorbeeld vuurkatoenfilm, polyethyleenformaldehydefilm, enz.), koolstoffilm of metaalfilm (bijvoorbeeld berylliumfilm, enz.). Onder routinematige werkomstandigheden kan aan de eisen worden voldaan met een plastic film, terwijl de voorbereiding van de plastic film in de zelfklevende film van brandkatoen relatief eenvoudig is, maar de sterkte is niet zo sterk als die van polyethyleenformaldehydefilm.
