Principes en structurele kenmerken van fluorescentiemicroscopie
Fluorescentiemicroscoop is het gebruik van een hoge lichtopbrengst van de puntlichtbron, via het kleurfiltersysteem om een bepaalde golflengte van licht uit te zenden (zoals ultraviolet 3650 of violetblauw 4200) als excitatielicht, de excitatie van fluorescerend materiaal binnenin het exemplaar zendt een verscheidenheid aan verschillende kleuren fluorescentie uit en wordt vervolgens voor observatie vergroot door het objectief en de oculairs. Op deze manier is het, in de sterk contrasterende achtergrond, zelfs als de fluorescentie erg zwak is, gemakkelijk te identificeren, hoge gevoeligheid, voornamelijk gebruikt voor de studie van celstructuur en -functie en chemische samenstelling. De basisstructuur van een fluorescentiemicroscoop bestaat uit een gewone optische microscoop plus enkele accessoires (zoals een fluorescentielichtbron, excitatiefilters, tweekleurige bundelscheider en blokkeerfilters, enz.). Fluorescerende lichtbron - algemeen gebruikte ultrahogedrukkwiklamp (50-200W), die verschillende golflengten licht kan uitstralen, maar elk fluorescerend materiaal heeft een sterkste fluorescentie-excitatiegolflengte, dus de noodzaak om excitatiefilters toe te voegen (in het algemeen ultraviolet, violet, blauw en groen excitatiefilter), zodat alleen een bepaalde golflengte van excitatielicht door de bestraling van preparaten komt, terwijl het andere licht wordt geabsorbeerd. Het is dus noodzakelijk om een excitatiefilter toe te voegen (meestal ultraviolet, violet, blauw en groen excitatiefilters), zodat slechts een bepaalde golflengte aan excitatielicht door het preparaat gaat, terwijl ander licht wordt geabsorbeerd. Wanneer elke stof wordt bestraald met excitatielicht, zendt deze binnen zeer korte tijd zichtbare fluorescentie uit met een langere golflengte dan die van het bestraalde licht. Fluorescentie heeft een specificiteit, doorgaans zwakker dan het excitatielicht, om de specifieke fluorescentie in de objectieflens te kunnen waarnemen, achter de noodzaak om een blokkeer- (of onderdrukkings) filter toe te voegen.
Zijn rol is tweeledig:
Eén daarvan is het absorberen en blokkeren van het excitatielicht in het oculair, om de fluorescentie en oogbeschadiging niet te verstoren.
De tweede is het selecteren en doorlaten van de specifieke fluorescentie, waardoor een specifieke fluorescerende kleur wordt weergegeven. De twee typen filters moeten samen worden geselecteerd en gebruikt.
