Vereisten voor de productie van specimens voor de fluorescentiemicroscoop
(1) Glazen glijbaan
De dikte van de glijbaan moet tussen 0,8 en 1,2 mm liggen. Als het objectglaasje te dik is, zal het enerzijds meer licht absorberen en anderzijds niet toestaan dat het excitatielicht zich op het preparaat verzamelt. Het glasplaatje moet glad zijn, uniform van dikte en mag geen duidelijke spontane fluorescentie vertonen. Soms zijn kwartsglasplaatjes nodig.
(2) Dek het glasplaatje af
De dikte van het dekglas is ongeveer 0,17 mm en is glad. Om het excitatielicht te verbeteren, kan ook interferentie-afdekglas worden gebruikt. Dit is een speciaal ontworpen dekglas met meerdere lagen stoffen (zoals magnesiumfluoride) die verschillende interferentie-effecten hebben op licht van verschillende golflengten. Het kan ervoor zorgen dat fluorescentie soepel verloopt, terwijl reflectie-excitatielicht het monster kan prikkelen.
(3) Voorbeeld
Weefselplakjes of andere monsters mogen niet te dik zijn. Als ze te dik zijn, wordt het meeste excitatielicht verbruikt in het onderste deel van het preparaat, terwijl het bovenste deel dat rechtstreeks door de objectieflens wordt waargenomen, niet volledig wordt geëxciteerd. Bovendien kunnen celoverlap of het maskeren van onzuiverheden het beoordelingsvermogen beïnvloeden.
(4) Afdichtmiddel
Glycerine wordt vaak gebruikt als fixeermiddel, dat geen spontane fluorescentie mag hebben, kleurloos en transparant moet zijn. De fluorescentiehelderheid is relatief helder bij pH 8.5-9.5 en verdwijnt niet gemakkelijk snel. Daarom wordt gewoonlijk een gelijk mengsel van glycerol en 0.5mol/lpH9.0-9.5 carbonaatbuffer gebruikt als bevestigingsmiddel.
(5) Spiegelolie
Bij gebruik van een donkerveldfluorescentiemicroscoop en een oliemicroscoop om preparaten te observeren, is het noodzakelijk lensolie te gebruiken. Het beste kunt u een speciaal gemaakte niet-fluorescerende lensolie gebruiken, die ook vervangen kan worden door glycerol, zoals hierboven vermeld. Vloeibare paraffine kan ook worden gebruikt, maar de brekingsindex is laag en heeft een kleine invloed op de beeldkwaliteit.
