Het principe en de structurele kenmerken van fluorescentiemicroscopie
Fluorescentiemicroscopie gebruikt een punt met een hoge lichtopbrengst om een bepaalde golflengte van licht uit te zenden (zoals ultraviolet licht 3650 inch of violetblauw licht 4200 inch) via een kleurfiltersysteem als excitatielicht, en prikkelt de fluorescerende stoffen in het monster om verschillende kleuren van fluorescentie. Daarna wordt het waargenomen door vergroting van de objectieflens en het oculair. Op deze manier is het gemakkelijk te herkennen, zelfs wanneer de fluorescentie erg zwak is tegen een sterke achtergrond, met een hoge gevoeligheid. Het wordt voornamelijk gebruikt voor de studie van de celstructuur en -functie, evenals de chemische samenstelling. De basisstructuur van een fluorescentiemicroscoop bestaat uit een gewone optische microscoop plus accessoires zoals een fluorescerende lichtbron, excitatiefilter, dichroïsche bundelscheider en blokkeerfilter. Fluorescerende lichtbronnen gebruiken over het algemeen ultrahogedrukkwiklampen (50-200W), die licht van verschillende golflengten kunnen uitzenden. Elke fluorescerende stof heeft echter een excitatielichtgolflengte die de sterkste fluorescentie produceert, dus excitatiefilters (meestal ultraviolette, paarse, blauwe en groene excitatiefilters) moeten worden toegevoegd om alleen een bepaalde golflengte van excitatielicht door te laten dringen en de exemplaar, terwijl het al het andere licht absorbeert. Na te zijn bestraald met excitatielicht, zendt elke stof in zeer korte tijd zichtbare fluorescentie uit die langer is dan de bestralingsgolflengte. Fluorescentie heeft specificiteit en is over het algemeen zwakker dan excitatielicht. Om specifieke fluorescentie waar te nemen, is het noodzakelijk om blokkering (of onderdrukking) achter de objectieflens toe te voegen en deze in combinatie te gebruiken.
Verschil tussen fluorescentiemicroscoop en gewone microscoop
1. De verlichtingsmethode is meestal een vallende straal, waarbij de lichtbron door een objectieflens op het monster wordt geprojecteerd;
2.De lichtbron is ultraviolet licht, met een kortere golflengte en hogere resolutie dan gewone microscopen;
3. Er zijn twee speciale filters, die voor de lichtbron wordt gebruikt om zichtbaar licht uit te filteren, en die tussen het oculair en de objectieflens wordt gebruikt om ultraviolette stralen uit te filteren om het menselijk oog te beschermen.
Fluorescentiemicroscopie is ook een soort optische microscopie, met als belangrijkste verschil de verschillende excitatiegolflengten. Dit bepaalt de verschillen in structuur en gebruik tussen fluorescentiemicroscopie en gewone optische microscopie.
Fluorescentiemicroscopie is een basisinstrument voor immunofluorescentiecytochemie. Het is samengesteld uit hoofdcomponenten zoals een lichtbron, een filterplaatsysteem en een optisch systeem. Het gebruikt een bepaalde golflengte van licht om het monster te prikkelen om fluorescentie uit te zenden, en vergroot het door een objectieflens en oculairsysteem om het fluorescentiebeeld van het monster te observeren.
