Het principe, kenmerken en toepassing van fluorescentiemicroscoop
Het principe en de structurele kenmerken van de fluorescentiemicroscoop: de fluorescentiemicroscoop gebruikt een puntlichtbron met een hoge lichtopbrengst om een bepaalde golflengte van licht (zoals ultraviolet licht 3650 inch of paarsblauw licht 4200 inch) uit te zenden door het filtersysteem als excitatie licht om de fluorescentie in het preparaat te stimuleren. Nadat de substantie fluorescentie van verschillende kleuren uitzendt, wordt deze waargenomen door de vergroting van de objectieflens en het oculair. Op deze manier is het onder een sterke contrastachtergrond, zelfs als de fluorescentie erg zwak is, gemakkelijk te identificeren en heeft het een hoge gevoeligheid. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het onderzoek naar celstructuur en -functie en chemische samenstelling. De basisstructuur van een fluorescentiemicroscoop bestaat uit een gewone optische microscoop plus enkele accessoires (zoals een fluorescerende lichtbron, een excitatiefilter, een tweekleurenbundelsplitser en een blokkeerfilter, enz.). Fluorescerende lichtbron: gebruik over het algemeen een ultrahogedrukkwiklamp (50-200W), die licht van verschillende golflengten kan uitzenden, maar elke fluorescerende substantie heeft een excitatiegolflengte die de sterkste fluorescentie produceert, dus een excitatiefilter (meestal er zijn ultraviolette, paarse, blauwe en groene excitatiefilters), die alleen excitatielicht van een bepaalde golflengte doorlaten en het monster bestralen, terwijl ze ander licht absorberen. Nadat elke stof is bestraald met excitatielicht, zendt deze in zeer korte tijd zichtbare fluorescentie uit met een langere golflengte dan de bestralingsgolflengte. Fluorescentie is specifiek en over het algemeen zwakker dan excitatielicht. Om specifieke fluorescentie waar te nemen, is een blokkerend (of onderdrukkend) filter nodig achter de objectieflens.
Het heeft twee functies: de ene is om het excitatielicht te absorberen en te blokkeren om het oculair binnen te gaan, om de fluorescentie niet te verstoren en de ogen te beschadigen; de andere is om de specifieke fluorescentie te selecteren en door te laten, waarbij een specifieke fluorescerende kleur wordt weergegeven. De twee filters moeten samen worden gebruikt.
Er zijn twee soorten fluorescentiemicroscopen in termen van hun optische paden:
1. Transmissie-fluorescentiemicroscoop: de excitatielichtbron wordt door het monstermateriaal door een condensorlens geleid om fluorescentie op te wekken. Vaak wordt een donkerveldcollector gebruikt en een gewone collector kan ook worden gebruikt om de spiegel zo af te stellen dat het excitatielicht wordt omgeleid en omgeleid naar het preparaat. Dit is een oudere fluorescentiemicroscoop. Het voordeel is dat de fluorescentie sterk is bij een lage vergroting, maar het nadeel is dat de fluorescentie afneemt met toenemende vergroting. Daarom is het beter om grotere specimenmaterialen te observeren.
2. Epi-fluorescentiemicroscoop is een nieuw type fluorescentiemicroscoop dat in de moderne tijd is ontwikkeld. Het verschil is dat het excitatielicht van de objectieflens naar het oppervlak van het monster valt, dat wil zeggen dat dezelfde objectieflens wordt gebruikt als de verlichtingscondensator en de objectieflens voor het verzamelen van fluorescentie. Er moet een dichroïsche bundelsplitser worden toegevoegd in het lichtpad, dat 45 graden verwijderd is van het lichte uranium. Het excitatielicht wordt gereflecteerd in de objectieflens en verzameld op het monster. De fluorescentie die door het monster wordt gegenereerd en het excitatielicht dat wordt gereflecteerd door het lensoppervlak van de objectieflens en het oppervlak van het dekglas gaan tegelijkertijd de objectieflens binnen en keren terug naar de tweekleurige straalsplitser om het excitatielicht gescheiden te maken van fluorescentie , resterend excitatielicht wordt geabsorbeerd door blokkerende filters. Zoals het overschakelen naar een combinatie van verschillende excitatiefilters / tweekleurige straalsplitsers / blokkeerfilters, kan het voldoen aan de behoeften van verschillende fluorescerende reactieproducten. Het voordeel van dit soort fluorescentiemicroscopen is dat de verlichting van het gezichtsveld uniform is, de beeldvorming helder is en hoe groter de vergroting, hoe sterker de fluorescentie.
Hoe een fluorescentiemicroscoop te gebruiken
1. Schakel de lichtbron in en de ultrahogedrukkwiklamp moet een paar minuten opwarmen om het helderste punt te bereiken.
2. De transmissiefluorescentiemicroscoop moet het vereiste excitatiefilter tussen de lichtbron en de condensor installeren en het bijbehorende blokkeerfilter achter de objectieflens installeren. Epifluorescentiemicroscopen moeten het vereiste excitatiefilter/tweekleurige bundelsplitser/blokkeerfilterinzetstukken in de sleuven in het optische pad plaatsen.
3. Observeer met een lens met een lage vergroting en pas het midden van de lichtbron aan zodat deze zich in het midden van de gehele verlichtingsvlek bevindt volgens het instelapparaat van verschillende modellen fluorescentiemicroscopen.
4. Plaats het proefstuk en observeer na het scherpstellen. Tijdens het gebruik moet er op worden gelet: niet direct met het eindfilter observeren, om geen oogletsel te veroorzaken; bij het observeren van preparaten met een olielens moet u een speciale olielens zonder fluorescentie gebruiken; nadat de hogedrukkwiklamp is uitgeschakeld, kan deze niet onmiddellijk weer worden ingeschakeld en moet deze worden getest. Het kan na 5 minuten opnieuw worden gestart, anders is het onstabiel en heeft het invloed op de levensduur van de kwiklamp.
