Wat zijn de speciale structurele componenten van een fluorescentiemicroscoop?
Het kleurenfilterblok is een belangrijk onderdeel van een fluorescentiemicroscoop en de kerncomponenten ervan bestaan uit een eerste barrièrefilter voor excitatielicht, een tweede barrièrefilter voor emissielicht en een straalsplitsende spiegel. De kleurenfiltermodellen en namen van verschillende fabrikanten zijn vaak inconsistent.
1. Excitatielichtfilter en emissielichtfilter: Op basis van de kenmerken van de lichtbron en het fluorescerende pigment worden gewoonlijk de volgende drie soorten matching geselecteerd om excitatielicht binnen een bepaald golflengtebereik te leveren en de door het monster geëxciteerde fluorescentie door te laten en het oculair te bereiken voor beeldvorming.
UV-excitatie: Het excitatielichtfilter kan UV-licht doorlaten en zichtbaar licht boven 400 nm blokkeren. Het overeenkomstige emissielichtfilter laat blauw licht door en het licht in het gezichtsveld lijkt blauw, zoals bij toepassing op DAPI-kleuring.
Excitatie van blauw licht: Het excitatielichtfilter kan blauw licht doorlaten en licht van andere golflengten blokkeren. Het bijbehorende emissielichtfilter laat groen licht door, zoals GFP-kleuringsmarkers.
Groen licht-excitatie: Het excitatielichtfilter laat groen licht door en blokkeert licht van andere golflengten. Het bijbehorende emissielichtfilter laat meestal rood licht door, zoals Rhodamine-kleuring.
2. Semi-transparant en semi-reflecterend kleurenfilter: zijn functie is om het excitatielicht volledig te blokkeren en te reflecteren; En straal licht uit binnen het overeenkomstige golflengtebereik. Het model komt overeen met het excitatielichtfilter en het emissielichtfilter.
(2) Objectieflens en oculair
Er kunnen verschillende objectieflenzen worden toegepast, maar het is het beste om lenzen te kiezen met toegevoegde schaal en reductie van chromatische aberratie, omdat hun zelffluorescentie extreem laag is en hun lichttransmissieprestaties (golflengtebereik) geschikt zijn voor fluorescentie. Vanwege het feit dat de fluorescentiehelderheid van een beeld in het microscoopveld direct evenredig is met het kwadraat van de diafragmaverhouding van de objectieflens en omgekeerd evenredig met de vergroting ervan, moet, om de helderheid van fluorescentiebeelden te verbeteren, een objectieflens met een grotere diafragmaverhouding worden gebruikt. Speciaal voor preparaten met onvoldoende fluorescentie moet een objectieflens met een hoge diafragmaverhouding en een hoge lichttransmissie worden gebruikt, vergezeld van een oculair met de laagst mogelijke vergroting.
(3) Andere optische apparaten
De reflecterende laag van een spiegel is meestal bedekt met aluminium, omdat aluminium minder ultraviolet en zichtbaar licht absorbeert in het blauwpaarse gebied en meer dan 90% reflecteert (terwijl zilver een reflectiviteit heeft van slechts 70%). Over het algemeen worden platte spiegels gebruikt. Focuslens, speciaal ontworpen en vervaardigd voor fluorescentiemicroscopen, is gemaakt van kwartsglas of ander glas dat ultraviolet licht doorlaat. Het apparaat voor vallend licht heeft niet alleen de functie van een doorlatende lichtbron, maar is ook geschikter voor directe observatie van ondoorzichtige en semi-transparante monsters, zoals dikke platen, filtermembranen, bacteriekolonies, weefselculturen en andere monsters. De afgelopen jaren zijn er veel nieuwe typen fluorescentiemicroscopen ontwikkeld met behulp van een apparaat voor vallend licht, bekend als een fluorescentiemicroscoop voor vallend licht.
(4) Lichtbron
Tegenwoordig worden hogedrukkwiklampen van 50 of 100 W vaak gebruikt als lichtbronnen. Tijdens bedrijf vindt er ontlading plaats tussen twee elektroden, waardoor kwik verdampt en de druk in de bol snel toeneemt (dit proces duurt gewoonlijk ongeveer 5-15 minuten). Tijdens dit proces worden lichtkwanta uitgezonden en is de golflengte van het vrijgekomen licht voldoende om verschillende fluorescerende stoffen te exciteren. Daarom wordt het veel gebruikt in fluorescentiemicroscopen.
De levensduur van kwiklampen is relatief kort, meestal 200 uur. Als reactie op deze beperking in de levensduur is de afgelopen jaren een nieuw type fluorescentielichtbron X-Cite op grote schaal gebruikt met een superlange levensduur van de lamp van 2000 uur en flexibel gebruik - geen voorverwarmen vereist, klaar voor gebruik.
