PH meter - Bepaling en aanpassing van de pH van het medium
Alle micro-organismen worden beïnvloed door de pH van de omgeving waarin ze leven. Vaak vernauwt de aanwezigheid van selectieve soorten het pH-bereik waarin ze groeien. Soms kan de zuurgraad of alkaliteit van het medium ook een groeiselectiefactor zijn. Voor biochemische testmedia is het pH-bereik waarin micro-organismen tk-activiteit in het substraat vertonen echter smaller dan het pH-bereik dat nodig is voor groei: daarom is het belangrijk om de pH van de media aan te passen aan het verwachte bereik. Wanneer het laboratorium het medium bereidt volgens de mediumsamenstelling, moet de pH worden gecontroleerd en aangepast. Opgemerkt moet worden dat zelfs voor het kant-en-klare synthetische gedehydrateerde medium dat door de fabrikant wordt geleverd (vooral voor sommige uit de voorraad gedehydrateerde medium), de uiteindelijke pH moet worden gemeten na het maken van het experimentele medium.
De meest nauwkeurige manier om de pH van een medium te meten is met een pH meter. Voor gebruik moet het worden gekalibreerd met een standaard bufferoplossing met een bekende pH (meestal is de pH 4 tot 7). Spoel de elektrode van de pH-meter af met gedestilleerd water en dompel deze onder in het kweekmedium in het bekerglas en lees vervolgens de pH van het kweekmedium af van de schaal van de pH-meter. Elke fabrikant geeft gedetailleerde gebruiksaanwijzingen voor elk type pH-meter.
Bij het bereiden van het kweekmedium kan de PH eenvoudig worden aangepast met behulp van een pH-meter met mechanisch roeren. Het kweekmedium moet worden bereid in een container (zoals een grote beker) die continu kan worden geroerd. of met teflon omwikkelde magneten. De pH van het agarbevattende medium moet na het ontdooien worden aangepast, wat gemakkelijk kan worden gedaan met een verwarmbare magnetische roerder. Gebruik bij het aanpassen van de pH een standaard bufferoplossing met een bekende pH om de pH-meter eerst te kalibreren. Plaats vervolgens de samengestelde elektrode en weerstandsthermometer (indien aanwezig) in het medium, voeg langzaam de juiste hoeveelheid zoutzuur en natriumhydroxide toe vanaf het uiteinde van de beker weg van de elektrode, zodat het medium de vereiste pH kan bereiken en behouden.
De temperatuurcompensatie van de pH-meter moet rekening houden met het effect van temperatuur op het elektrodesysteem: in sommige verdunningen en media verandert de pH aanzienlijk met de temperatuur. Voor vloeibare media en verdunningen kan de pH meestal worden aangepast en gemeten bij 25 graden of bij de temperatuur waarbij ze worden gebruikt.
De pH van het agarmedium moet na het oplossen worden aangepast en de oplostemperatuur is hoger dan 45 graden: daarom moet de pH van het vaste medium worden bepaald bij de gebruikstemperatuur. Op dit moment moet een samengestelde elektrode met platte kop worden gebruikt en moet de temperatuurcompensatie van de pH-meter handmatig worden gekalibreerd. Als bij het bereiden van het kweekmedium wordt vastgesteld dat de pH van het kweekmedium verschilt tussen de smelttoestand en de stollingstoestand, betekent dit dat er een fout is opgetreden bij het aanpassen van de pH.
Evenzo kan het bereide medium, wanneer het door hitte is gesteriliseerd (bijvoorbeeld in een autoclaaf), ook pH-veranderingen ondergaan. Voor het gedehydrateerde medium heeft de fabrikant hier rekening mee gehouden, en meestal is het niet nodig om de pH aan te passen, maar de pH van het te gebruiken medium moet zorgvuldig worden gecontroleerd. Als de pH van het gedehydrateerde agarmedium tijdens het opnieuw oplossen of bereiden moet worden aangepast, is het het beste om dit na de sterilisatiestap aan te passen met gesteriliseerd zoutzuur en natriumhydroxideoplossing om vorming van oververhitting van het medium te voorkomen. Bij het bereiden van media met verschillende grondstoffen of geneesmiddelen, moet de pH van de media na het autoclaveren worden gecontroleerd. Bovendien, als blijkt dat de pH van het medium na elke autoclaaf hetzelfde verandert, kan de pH op de juiste manier worden aangepast bij het bereiden van het medium. Het is echter nog steeds nodig om de uiteindelijke pH van het medium na sterilisatie te bepalen.
