Wat zijn de voordelen van confocale lasermicroscopie
Vergeleken met traditionele wide-field microscopen, heeft laser scanning confocale microscopie de kenmerken van high definition, hoge resolutie en hoge gevoeligheid. Het wordt veel gebruikt op het gebied van biogeneeskunde en is op dit gebied een belangrijk hulpmiddel voor beeldvorming geworden. Waarom kan confocal zoveel liefde krijgen, en welke voordelen heeft het? Dit artikel somt drie aspecten op om de voordelen van confocaal te bespreken.
Vang alleen het signaal op het brandpuntsvlak op, waardoor het beeld vrij van onscherpte wordt
Dus hoe bereikt confocale microscopie dit voordeel? Dit komt door de belangrijkste confocale hardware - het gaatje, zoals weergegeven in figuur 2. Het is een klein gaatje voor de detector en geplaatst op het optische vlak dat conjugeerd is met het brandpuntsvlak van het monster. Wanneer het excitatielicht het monster bestraalt, zullen zowel het brandpuntsvlak als het niet-brandpuntsvlak van het monstergebied worden opgewonden om fluorescentiesignalen te genereren, de juiste pinhole-grootte (meestal 1 Au) aan te passen, zodat het fluorescentiesignaal op het brandpuntsvlak (groene stippellijn) kunnen fluorescerende signalen zijn (rode en blauwe stippellijnen) die door het gaatje gaan om de detector uit het brandpuntsvlak te bereiken, kunnen de detector niet bereiken via het gaatje. Door de toevoeging van hardware-pinholes kan de confocale heldere en hoogwaardige beelden verkrijgen zonder de methode van het maken van gewone fluorescentiemicroscopen te veranderen.
Vanwege het bestaan van de pinhole kunnen we het signaal alleen op het brandpuntsvlak verkrijgen en een tweedimensionaal beeld met hoge resolutie verkrijgen. Door continu de positie van de Z-as aan te passen, kunnen tweedimensionale beelden op verschillende posities van de Z-as worden verkregen en kan een reeks continue "optische schijf"-beelden worden verkregen. Na het verkrijgen van deze optische plakjes kan de 3D-module die is uitgerust met de instrumentsoftware worden gebruikt om het 3D-beeld te reconstrueren om een duidelijk 3D-beeld te construeren. Deze niet-destructieve, continue verzameling van optische plakbeelden realiseert de functie van "cel-CT".
De nauwkeurigheid van colokalisatieresultaten hangt nauw samen met de resolutie van het beeld, dus we moeten een beeldvormingsmethode met een hogere resolutie kiezen bij het uitvoeren van colokalisatie-experimenten. In vergelijking met traditionele microscopen is confocale microscopie een krachtig hulpmiddel geworden voor onderzoek naar colokalisatie vanwege de hoge resolutievoordelen.
Vanwege het bestaan van de diffractielimiet is de conventionele confocale optische resolutie ongeveer 200 nm. Wanneer we structuren groter dan 200 nm moeten observeren, kan confocaal de mate van colokalisatie nauwkeurig bepalen. Als colokalisatie-analyse vereist is, kan de colokalisatie-analysemodule die is uitgerust met de confocale software worden geselecteerd.
